5 июля 2012

Основные изменения в свойствах вирусных частиц

С помощью рестриктазы Нае III установлено, что в геноме SV40 имеется участок длиной около 140 нуклеотидов, вариации в котором и вызывают основные изменения в свойствах вирусных частиц (Newbold, 1976).

Пока этот фрагмент еще точно не локализован, по-видимому, он ассоциирован с участком, кодирующим поздние функции. Не получено прямых доказательств в пользу транскрипции этой части генома, однако анализ тотальной популяции поздней вирусной РНК свидетельствует о том, что этот вариабельный фрагмент только транскрибируется и в дальнейшем не транслируется, т. е. является спейсером.

Возможно, что транскрипт этого участка удастся выявить среди поздних 19S РНК, то не среди поздних 16S РНК-транскриптов. Выделен 316-членный фрагмент ДНК SV40, содержащий точку начала репликации вирусной ДНК и ДНК, комплементарную к 5´-концам некоторых ранних и поздних цитоплазматических РНК (Subramanian et al., 1977).

Этот сегмент, полученный после гидролиза рестриктазой Е. coli RII (G), расщепляли рестриктазами Нае III, Hind III, Alu I и Hinf I и картировали субфрагменты. Кроме того, эти субфрагменты использовали как матрицы для синтеза РНКовых копий полимеразой из Е. coli и определяли их последовательности.

Сопоставление полученных данных показало, что ранние и поздние мРНК SV40 считываются в противоположных направлениях с разных цепей ДНК таким образом, что их 5´-концевые участки перекрываются, будучи комплементарными друг другу.

Участок перекрывания имеет длину 60 — 100 нуклеотидов и включает область ДНК, содержащую точку начала репликации.

Установлено, что все пять участков инициации транскрипции in vitro локализуются на минус-нити ДНК SV40 прямо или вблизи от областей генома, расщепляющихся нуклеазой SI и денатурирующихся в условиях мягкой обработки (Lebowitz et al., 1977).

Это свидетельствует о том, что участки инициации располагаются в областях, находящихся или в расплетенном состоянии, или легко расплетающихся под влиянием различных воздействий. Такие данные согласуются с ожидаемой структурой промоторов.

Кроме пяти участков инициации, в которых 5´-концевым нуклеотидом является АТФ, обнаружены три участка, имеющих на 5´-конце только ГТФ в качестве инициирующего нуклеотида. Оказалось, что 5´-концевые инициирующие фрагменты разделяются на четыре класса и имеют длину 6 — 9 нуклеотидов (AI, АII, AIIIa, AIIIb).

Один участок инициации локализуется на фрагменте Hin G близко к соединению Hin — G — В и дает фрагмент АII; два перекрывающихся фрагмента Hin — А — Нае — А содержат участки, комплементарные фрагментам AI и АIII, и два рестриктазных фрагмента Hin — А — Нае — Е в транскрипции образуют фрагменты AI И АIII.

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Метод искусственных гетерокарионов оказался весьма эффективен для многих тест-систем клеток, трансформированных как РНК-, так и ДНК-содержащими онковирусами. В некоторых случаях индикаторные культуры использовали даже для титрования освобожденного вируса по фокусам трансформации, которые он индуцировал (Svoboda et al., 1975). Во всех этих экс-периментах чем больше был процент гетерокарионов, тем выше оказалась эффективность метода. Однако в системах,…

В экспериментах, проведенных А. И. Агеенко и соавт. (1975), из перевивных сарком (с 50-й по 60-ю генерацию), индуцированных у хомяков аденовирусом 12-го типа, полный инфекционный вирус выделялся постоянно. Обнаружено, что при заражении центрифугатами разрушенных клеток перевивных сарком культуры почки эмбриона человека (ПЭЧ) в среднем через 5 дней отмечалось начало цитогенного действия вируса. Из первичноиндуцированных сарком…

Установлена прямая пропорциональность между дозой различных агентов (митомицин С, бромдезоксиуридин, УФ- и 60Со-γ-облучение) и урожаем вируса, освобожденного из трансформированных клеток (Kaplan et al., 1975). Урожай вируса увеличивается по сравнению с контролем в 1000 — 10 000 раз. В линиях — продуцентах инфекционного SV40 доля индуцированных клеток составляла 2 — 6% (по данным определения продукции V-антигена…

Клетки, трансформированные всеми исследованными в настоящее время онкогенными ДНК-содержащими вирусами, в основном являются непермиссивными для полного репродуктивного цикла трансформирующего их вируса, и поэтому естественно, что полный инфекционный вирус ими не продуцируется. Как известно, существуют два крайних ответа пермиссивных клеток природного хозяина при взаимодействии с геномом ДНК-содержащих онковирусов — лизис и трансформация. Трансформация осуществляется тогда, когда…

Итак, по характеру взаимоотношений онковируса с трансформированной клеткой можно выделить следующие типы опухолевых клеток. Вируспродуцирующие клетки. Как правило, это относится к РНК-содержащим вирусам. Вирогенные клетки, в которых удается активировать вирусный геном с помощью различных методических приемов (трансплантации их естественным хозяевам онковируса или при использовании «контактной индукции», т. е. прямого контакта опухолевой клетки с чувствительной «индикаторной»…