29 июня 2012

Синтез двух видов РНК

При продуктивной аденовирусной инфекции, как и в случае инфекции паповавирусами, осуществляется синтез двух видов РНК — ранних и поздних. Синтез ранней вирусспецифической РНК аденовирусов продолжается на поздних этапах инфекции, а синтез поздней РНК на ранних стадиях практически отсутствует.

На физической карте генома А2 идентифицированы два гена, кодирующих синтез вирусассоциированной 5,5S РНК длиной в 156 нуклеотидов. Эта РНК обнаруживается в цитоплазме, не связанной с рибосомами, поскольку высокая степень спирализации, по-видимому, препятствует выполнению ею функции мРНК.

Ген I расположен вокруг положения 30 ед. карты и расщепляется рестриктазой BamHI. Ген II локализован на той же нити ДНК А2 справа от гена I, что соответствует положению от 30,3 до 32,2 ед. карты. Расположение генов I и II вблизи 5´-конца области ДНК, соответствующей генам стабильных поздних мРНК, ответственных за синтез структурных вирусных белков, может предопределять участие этой ДНК в регуляции аденовирусной экспрессии на поздних стадиях инфекции.

В экспериментах на Ts-мутантах вируса А5 получены данные, указывающие на то, что, по-видимому, акт репликации вирусной ДНК не требуется для транскрипции поздних вирусных мРНК в клетках, если однажды репликация вирусной ДНК уже началась (Carter, Ginsberg, 1976). На поздних стадиях инфекции в транскрипционном комплексе вируса А2 обнаруживалось 30 — 45% неинтегрированной в хромосомы клеток HeLa ДНК А2, находящейся в ядрах (Wilchelm et al., 1976).

Во фракциях комплекса с низкими константами седиментации выявлена РНК-полимеразная активность, как в форме РНК-полимеразы, связанной с ДНК, так и в форме свободной РНК-полимеразы: 95% РНК-полимеразной активности определялось РНК-полимеразой В-типа (ингибируемой низкими концентрациями а-аманитина) и 5% — РНК-полимеразой С-типа (ингибируемой только высокими концентрациями α-аманитина).

В опытах по РНК — ДНК-гибридизации синтезированная этим комплексом РНК на 90% гибридизировалась с ДНК А2, причем почти исключительно с ее 1-цепью. In vivo в этот период инфекции также транскрибируется почти исключительно 1-цепь ДНК А2.

РНК, синтезируемая комплексом in vitro, характеризовалась значительной гетерогенностью по величинам констант седиментации (6 — 28S). Предполагают, что in vitro процесс транскрипции вирусной ДНК осуществляется в несколько раз медленнее, чем in vivo, в составе ядер зараженных аденовирусом клеток.

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Метод искусственных гетерокарионов оказался весьма эффективен для многих тест-систем клеток, трансформированных как РНК-, так и ДНК-содержащими онковирусами. В некоторых случаях индикаторные культуры использовали даже для титрования освобожденного вируса по фокусам трансформации, которые он индуцировал (Svoboda et al., 1975). Во всех этих экс-периментах чем больше был процент гетерокарионов, тем выше оказалась эффективность метода. Однако в системах,…

В экспериментах, проведенных А. И. Агеенко и соавт. (1975), из перевивных сарком (с 50-й по 60-ю генерацию), индуцированных у хомяков аденовирусом 12-го типа, полный инфекционный вирус выделялся постоянно. Обнаружено, что при заражении центрифугатами разрушенных клеток перевивных сарком культуры почки эмбриона человека (ПЭЧ) в среднем через 5 дней отмечалось начало цитогенного действия вируса. Из первичноиндуцированных сарком…

Установлена прямая пропорциональность между дозой различных агентов (митомицин С, бромдезоксиуридин, УФ- и 60Со-γ-облучение) и урожаем вируса, освобожденного из трансформированных клеток (Kaplan et al., 1975). Урожай вируса увеличивается по сравнению с контролем в 1000 — 10 000 раз. В линиях — продуцентах инфекционного SV40 доля индуцированных клеток составляла 2 — 6% (по данным определения продукции V-антигена…

Клетки, трансформированные всеми исследованными в настоящее время онкогенными ДНК-содержащими вирусами, в основном являются непермиссивными для полного репродуктивного цикла трансформирующего их вируса, и поэтому естественно, что полный инфекционный вирус ими не продуцируется. Как известно, существуют два крайних ответа пермиссивных клеток природного хозяина при взаимодействии с геномом ДНК-содержащих онковирусов — лизис и трансформация. Трансформация осуществляется тогда, когда…

Итак, по характеру взаимоотношений онковируса с трансформированной клеткой можно выделить следующие типы опухолевых клеток. Вируспродуцирующие клетки. Как правило, это относится к РНК-содержащим вирусам. Вирогенные клетки, в которых удается активировать вирусный геном с помощью различных методических приемов (трансплантации их естественным хозяевам онковируса или при использовании «контактной индукции», т. е. прямого контакта опухолевой клетки с чувствительной «индикаторной»…