29 июня 2012

Эндогенная активность в синтезе РНК транскрипционного растворимого 55S-комплекса

Транскрипционный растворимый 55S-комплекс ДНК-белок вирусов PY и SV40 первичноинфицированных клеток, прочно связанный с мембранами ядер, обладает высокой эндогенной активностью в синтезе РНК.

 Максимальная активация комплекса достигалась комбинированной обработкой мембран саркозилом, тритоном и 0,2 моль раствором NaCl. 55Э-комплекс ДНК-белок проявлял незначительную активность в РНК-полимеразной системе (Gariglio, Mousset, 1977). Синтез вирусспецифической мРНК чувствителен к α-аманитину, что свидетельствует об участии РНК-полимеразы II (или В) в транскрипции вирусной ДНК, которая входит в состав комплекса.

Установлено, что в продуктивной системе до начала синтеза вирусной ДНК в инфицированных клетках транскрибируется небольшая часть вирусного генома с ранних генов, экспрессия которых, вероятно, не обусловливается специальным механизмом (конформационная регуляция).

В то же время работа генов на поздних этапах репликации вируса контролируется уже на уровне транскрипции и посттранскрипционной модификации.

Предполагают, что 19S РНК является конечным продуктом процессинга вирусной РНК паповавирусов в ядрах. Так как 16S РНК, главный компонент вирусной РНК в цитоплазме, отсутствует в ядрах, то ядерная 19S РНК является ее предшественником. Синтез вирусспецифических белков (в том числе и Т-антигена) и вирусных структурных белков V-антигенов осуществляется в цитоплазме, а затем они мигрируют в ядро клетки. В трансформированных клетках и при абортивной инфекции ДНК-содержащими онковирусами синтез Т-антигенов продолжается, в то время как на поздних этапах продуктивного цикла синтез прекращается. Следовательно, синтез Т-антигена предшествует репликации вирусной ДНК, индукции синтеза клеточной ДНК и синтезу вирусных структурных белков.

Показано, что экспрессия генов, ответственных за синтез Т-антигена, возрастает в S-фазе и достигает максимума в ядрах, находящихся в фазе G2. Во время митоза Т-антиген обнаруживается в цитоплазме (Khoury, May, 1977). Предполагают, что Т-антиген может регулировать собственный синтез либо путем репрессии продукции ранней вирусной РНК, либо путем стимуляции синтеза поздней РНК SV40, либо с помощью того и другого механизма.

При абортивной инфекции в непермиссивных клетках существенно ограничена транскрипция плюс-нити вирусной ДНК (поздние гены), а по содержанию ранних мРНК эти клетки не отличаются от пермиссивных.

Следовательно, например, абортивная инфекция мышиных клеток ЗТЗ SV40 сопровождается синтезом внутриядер-ного Т-антигена, а синтез вирусной ДНК и поздних V-антигенов отсутствует. Оказалось, что синтез V-антигенов можно стимулировать введением в непермиссивные клетки дополнительного количества ДНК SV40, причем не наблюдалось принципиальной разницы при инъекциях ДНК в ядро или цитоплазму (Graessmann et al., 1976).

Синтез как поздних V-антигенов, так и ранних Т-антигенов коррелировал с количеством молекул ДНК SV40, вводимых в клетки. При инъекциях 1000 — 2000 молекул ДНК синтез V-антигенов обнаруживался в 26% клеток (через 48 ч) и лишь в 4% клеток — при введении 250 — 500 молекул ДНК. При меньших количествах ДНК продукции V-антигенов не было.

Аналогичная картина наблюдалась и в том случае, когда использовали клетки ЗТЗ, уже трансформированные SV40. В пермиссивных системах экспрессия ранних и поздних генов SV40 не зависела от количества вводимых в клетку молекул ДНК SV40. При одновременном введении небольших количеств ДНК SV40 и вирусспецифических ранних мРНК обнаруживался синтез значительных количеств V-антигенов.

Когда при инъекции использовались только ДНК, наблюдался синтез Т-антигенов, но не V-антигенов. Предполагают, что экспрессия поздних генов SV40 прямо зависит от количества синтезирующихся ранних вирусспецифических продуктов.

В то же время цитозинарабинозид ингибировал индуцирующее действие больших количеств молекул ДНК SV40, стимулировавших синтез V-антигенов, т. е., вероятно, рестрикция экспрессии поздних генов SV40 обусловливается и клеточными факторами.


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Метод искусственных гетерокарионов оказался весьма эффективен для многих тест-систем клеток, трансформированных как РНК-, так и ДНК-содержащими онковирусами. В некоторых случаях индикаторные культуры использовали даже для титрования освобожденного вируса по фокусам трансформации, которые он индуцировал (Svoboda et al., 1975). Во всех этих экс-периментах чем больше был процент гетерокарионов, тем выше оказалась эффективность метода. Однако в системах,…

В экспериментах, проведенных А. И. Агеенко и соавт. (1975), из перевивных сарком (с 50-й по 60-ю генерацию), индуцированных у хомяков аденовирусом 12-го типа, полный инфекционный вирус выделялся постоянно. Обнаружено, что при заражении центрифугатами разрушенных клеток перевивных сарком культуры почки эмбриона человека (ПЭЧ) в среднем через 5 дней отмечалось начало цитогенного действия вируса. Из первичноиндуцированных сарком…

Установлена прямая пропорциональность между дозой различных агентов (митомицин С, бромдезоксиуридин, УФ- и 60Со-γ-облучение) и урожаем вируса, освобожденного из трансформированных клеток (Kaplan et al., 1975). Урожай вируса увеличивается по сравнению с контролем в 1000 — 10 000 раз. В линиях — продуцентах инфекционного SV40 доля индуцированных клеток составляла 2 — 6% (по данным определения продукции V-антигена…

Клетки, трансформированные всеми исследованными в настоящее время онкогенными ДНК-содержащими вирусами, в основном являются непермиссивными для полного репродуктивного цикла трансформирующего их вируса, и поэтому естественно, что полный инфекционный вирус ими не продуцируется. Как известно, существуют два крайних ответа пермиссивных клеток природного хозяина при взаимодействии с геномом ДНК-содержащих онковирусов — лизис и трансформация. Трансформация осуществляется тогда, когда…

Итак, по характеру взаимоотношений онковируса с трансформированной клеткой можно выделить следующие типы опухолевых клеток. Вируспродуцирующие клетки. Как правило, это относится к РНК-содержащим вирусам. Вирогенные клетки, в которых удается активировать вирусный геном с помощью различных методических приемов (трансплантации их естественным хозяевам онковируса или при использовании «контактной индукции», т. е. прямого контакта опухолевой клетки с чувствительной «индикаторной»…