18 апреля 2012

Электронно-микроскопический анализ изображений гетеродуплексов с последующей ДНК — ДНК-гибридизацией

Электронно-микроскопический анализ изображений гетеродуплексов с последующей ДНК — ДНК-гибридизацией показал, что Д-ДНК в основной массе представляют собой не просто О-ДНК с делециями, а содержат специфические последовательности, не гибридизирующиеся с О-ДНК.

Эти последовательности ковалентно связаны с ограниченным набором гибридизирующихся последовательностей. Причем в некоторых Д-ДНК вообще не идентифицировано последовательностей, гомологичных к О-ДНК.

Считают, что негибридизирующиеся участки в различных клоновых Д-ДНК могут как образовываться последовательностями ДНК клетки-хозяина, так и состоять из транслоцированных обратных или повторяющихся вирусных последовательностей.

Фрагменты клеточной ДНК, встроенные в вирусный геном, различны у разных вариантов Д-ДНК. Это свидетельствует о том, что рекомбинация между вирусным геномом и клеточной ДНК при литической инфекции осуществляется в нескольких участках.

С помощью метода молекулярной гибридизации показано, что клеточные фрагменты в дефектных вирионах распределены между повторяющимися сегментами вирусного генома и представляют собой как повторяющиеся, так и уникальные последовательности в отношении 1 : 3. Они не попадают в вирус вследствие случайной селекции всех последовательностей генома клеток-хозяина.

Таким образом, дефектные эволюционные варианты паповавирусов образуются в результате «вырезания» некоторых участков вирусного генома, интегрированного в клеточную ДНК и содержащего замещения из фрагментов ДНК хозяина, и последующей амплификации специфичных последовательностей вирусных ДНК до размеров, необходимых для инкапсуляции в частицы.

Исследование природы и внутримолекулярной локализации тандемно повторяющихся последовательностей ДНК неинфекционных дефектных вирусных частиц показало, что основная их часть происходит из той части генома, в которой локализуется участок (фрагменте) инициации процесса репликации (0,67 ед. карты).

Иными словами, все мутанты SV40 с повторами сохраняют и амплифицируют область репликации вирусной ДНК (Davoli et al., 1977). Наличие же нескольких копий фрагмента С создает преимущества в репликации таких дефектных молекул, которые реплицируются значительно быстрее не дефектных молекул ДНК.

Вместе с тем, несмотря на появление у эволюционных вариантов нескольких точек инициации, репликация ДНК начинается только в одной точке. Этот феномен можно объяснить существованием какого-либо лимитирующего фактора, необходимого для инициации. Возможно, что это продукт гена ASV40.

Наличие тандемно повторяющихся репликонов делает ДНК таких мутантов SV40 более активными в репликации. Это и послужило поводом для исследования их по аналогии с бактериальными плазмидами и репликоном фага X в качестве молекул-векторов для переноса, размножения и клонирования чужеродных прокариотических ДНК в животных клетках.

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Вирус герпеса саймири выделен из почечной культуры здоровой беличьей обезьяны, а вирус герпеса ателес — от здоровых паукообразных обезьян. Для обоих вирусов фибробласты и эпителиальные клетки обезьян являются пермиссивной системой, в ней вирусы размножаются с цитопатогенным эффектом и могут быть получены в больших количествах. Оба вируса распространяются горизонтально и очень широко охватывают популяции природных хозяев,…

К этой группе относятся вирусы простого герпеса (Herpes simplex) 1-го и 2-го типов (HSV1 и HSV2) и вирусы цитомегалии, обладающие трансформирующей активностью in vitro. HSV1 и HSV2 индуцируют опухоли у хомяков при введении новорожденным животным. ДНК HSV (молекулярная масса 96Х106) состоит из областей, названных А, В, С, L и S, которые организованы в последовательности АВ…

Инактивированные ультрафиолетовым облучением вирусы герпеса 1-го и 2-го типов трансформируют клетки хомяков, крыс и мышей, которые при имплантации соответствующим животным вызывают у них метастазирующие опухоли. Однако, хотя у таких животных появляются вируснейтрализующие антитела, в опухолевой ткани вирусная ДНК, как правило, не определяется. В сыворотках крови животных с опухолями выявлен фактор, угнетающий цитотоксичность лимфоцитов по отношению…

При непермиссивных условиях (повышенная температура) интактный вирус HSV1 in vitro, по-видимому, трансформирует клетки легкого человека. Итак, HSV2 имеет четко выраженное сродство к генитальным органам и, вероятно, передается половым путем. Вместе с тем встречаются больные раком шейки матки, в организме которых антител к вирусу нет. HSV1 ассоциирован с кожей и слизистой губ и носоглотки. Оба вируса…

Из пяти групп известных в настоящее время ДНК-содержащих вирусов только одна группа Parvo (мелкие с однонитевой молекулой ДНК и кубическим типом симметрии) не имеет представителей в семействе онковирусов. Важно отметить, что число онкогенных типов в каждой из четырех групп возрастает по мере исследования их потенциальной трансформирующей способности In vivo и in vitro. Результаты сероэпидемиологических исследований…