18 апреля 2012

Полные и дефектные геномы паповавирусов В (эволюционные варианты)

В настоящее время наиболее всесторонне и детально изучены вирусы PY и SV40. Инфекционные и онкогенные варианты вирусных частиц имеют единственную двойную циркулярную молекулу ДНК с содержанием Г+Ц 41 — 48%. Масса частиц SV40 равна 17Х106, а молекулярная масса ДНК — 2,3 — 2,5Х106. Частицы вируса полиомы тяжелее частиц SV40 и молекулярная масса их ДНК составляет 2,9 — 3,4Х106.

ДНК, экстрагированная из очищенных вирусных частиц, содержит три компонента:

  1. суперспирализованную двойную циркулярную ДНК с константой седиментации 20 — 21S, составляющую 70 — 90% от всей ДНК вируса (ДНК I);
  2. двойную циркулярную с разорванной одной нитью, имеющую константу седиментации 16S и, вероятно, образующуюся из первого компонента ДНК в процессе экстракции (ДНК II),
  3. развернутую биспиральную цепь (ДНК III). В вирусные частицы вместо вирусной ДНК (псевдовирионы) включаются линейные фрагменты до 20% клеточной ДНК, деградированные в процессе инфекции, с константой седиментации 12 — 14S и молекулярной массой ЗХ106.

Линейные формы ДНК III могут содержать как клеточные, так и вирусные нуклеотидные последовательности (Gruss, Sauer, 1977). Часть молекул ДНК III инфекционная и при введении ее в пермиссивные клетки может образовывать ДНК I, содержащую указанные выше последовательности. В зараженной клетке ДНК III индуцирует синтез Т-антигена и вирусных капсидных белков.

Результаты анализа подвижности рестрикционных фрагментов ДНК у биологически активных штаммов SV40 позволили установить, что делеция (нехватка сегмента) в их геномах расположена между 0,68 и 0,73 ед. карты ДНК этого вируса.

Величина такой делеции составляет около 75±10пар оснований ДНК (геном SV40 содержит всего около 55 000 пар оснований).

Эта несущественная часть генома лежит в поздней области и не влияет как на вегетативный рост, так и на трансформирующую способность вируса (Waldeck, Sauer, 1976).

Инфицирование вирусами PY и SV40 соответствующих чувствительных клеток с высокой множественностью заражения, сопровождающееся рекомбинациоными процессами, приводит к внутриклеточному образованию специфического класса замкнутых кольцевых укороченных и гетерогенных молекул ДНК с более низкой, чем у обычных вирусных ДНК (О-ДНК), плавучей плотностью.

Из этих молекул впоследствии формируются «легкие» вирионы. Подобные «облегченные» частицы описаны и у аденовирусов.

Используя то обстоятельство, что дефектные ДНК (Д-ДНК) представляют собой сверхспиральные молекулы, их можно выделить из индивидуальных клоповых изолятов и отделить от О-ДНК в градиенте CsCl — этидийбромид. Средняя контурная длина Д-ДНК в разных клеточных клонах составляет 47 — 92% от длины недефектной ДНК.

Установлено, что ДНК возникают в результате либо только делении вирусных последовательностей, достигающей 15 — 30% от длины молекулы О-ДНК, либо делеции и вставки фрагментов клеточной ДНК, которая осуществляется при интеграции ДНК мелких онковирусов с хромосомной ДНК и последующем выщеплении вирусной ДНК с фрагментом клеточной. Как в том, так и другом случае может происходить дупликация вирусных последовательностей.


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Установлено, что продуктивная инфекция и трансформация клеток под действием ДНК-содержащих онковирусов обычно взаимоисключают друг друга: клетки природного хозяина главным образом продуктивно инфицируются (пермиссивные клетки), в то время как клетки другого вида чаще трансформируются (непермиссивные клетки). Однако не всегда пермиссивность обусловливается «природной» клеточной системой, иногда онковирусы могут обладать довольно широким спектром цитопатогенного действия на клетки других…

Вирус Эпштейна — Барр (ВЭБ) систематически продуцируется клетками африканской лимфомы Беркитта в культуре и обнаруживается при электронно-микроскопическом исследовании. В небольшом проценте случаев ВЭБ синтезируют клетки лимфобластоидных линий. В некоторых клеточных линиях и биопсийном материале из лимфом Беркитта вирионы ВЭБ не определяются. По-видимому, синтез полных вирусных частиц начинается после эксплантации клеток лимфомы в культуру, что сопровождается…

В лимфобластных клетках, несущих геном ВЭБ, синтезируется не менее 4 групп белков, ассоциированных с вирусом: Ядерный антиген (ЭBNA), по-видимому, аналогичен Т-антигену папова- и аденовирусов. Он обнаруживается с помощью РСК. Однако в отличие от Т-антигена папова- и аденовирусов ЭБНА прочно связан с хроматином и не отделяется от хромосом в процессе митоза (Luka et al., 1977).  Химическая…

В обширных сероэпидемиологических исследованиях установлено, что высокие титры антител к ВЭБ чаще всего выявляются при двух злокачественных новообразованиях человека — лимфоме Беркитта и НФК, для которых характерно особое географическое распространение. Лимфома Беркитта встречается преимущественно в определенных районах экваториальной Африки и Новой Гвинеи, а карцинома носоглотки — наиболее частая злокачественная опухоль населения в некоторых областях Южного…

Вирус герпеса саймири выделен из почечной культуры здоровой беличьей обезьяны, а вирус герпеса ателес — от здоровых паукообразных обезьян. Для обоих вирусов фибробласты и эпителиальные клетки обезьян являются пермиссивной системой, в ней вирусы размножаются с цитопатогенным эффектом и могут быть получены в больших количествах. Оба вируса распространяются горизонтально и очень широко охватывают популяции природных хозяев,…