17 августа 2012

Трансформация in vitro

Трансформация in vitro, вероятно, так же как и in vivo, осуществляется многоэтапно. Определенный параллелизм прогрессии трансформированных клеток при культивировании и в организме животного позволяет отождествлять некоторые факты, полученные при исследовании процесса неопластического превращения в этих двух системах.

Появление и развитие всех свойств, характерных для бластоматозной клетки, как правило, не коррелируют во времени.

Следовательно, уже в первичнотрансформированных (инфицированных онковирусом) клетках проявляется основной принцип независимости прогрессии отдельных признаков. Такие первичнотрансформированные клетки чаще всего отличаются по своим свойствам как от нормальных, так и от опухолевых клеток.

При исследовании трансформации in vitro можно более четко проследить последовательные стадии опухолевой эволюции клеток, первично контактировавших с онкогенными вирусами.

С помощью метода клонирования удалось установить, что на первой стадии трансформации были только однослойные колонии, при пассировании которых возникали фокусы морфологически измененных клеток с многослойным ростом в монослойной культуре. Обратного перехода не отмечалось.

Опухоли in vivo возникали только при трансплантации клеток из многослойных колоний (Dulbecco, 1976). Вместе с тем разработаны методические приемы для получения ранней трансформации, главным образом под действием онкорнавирусов.

Например, RSV (штамм Шмидта — Руппина) через 14 ч вызывал трансформацию клеток куриного эмбриона и в течение 24 ч трансформировал более 90% инфицированных клеток (Hanabusa, 1970). В этом случае применялся ДЭАЭ-декстран, который резко усиливал прикрепление вируса к клеткам и активировал их размножение после вирусной инфекции.

Одним из важных факторов быстрого изменения культуры явилась синхронность деления клеток. Для выявления морфологических изменений в клетках оказался достаточным один цикл их деления.

При исследовании взаимодействия RSV с клетками млекопитающих установлено, что эффективность проникновения этого вируса довольно высока и в ряде случаев не отличается от таковой для куриных клеток (Ваder, 1972).

Однако эффективность трансформации значительно ниже: лишь 1/25 — 1/500 часть клеток, содержащих вирус, действительно трансформируется. Из таких клеток удается получить ревертанты, морфологически не отличимые от нормальных клеток.

И те и другие клетки содержат геном RSV (доказывается индукцией полного, инфекционного RSV методом искусственных гетерокарионов, создаваемых с помощью инактивированного вируса Сендай).

Трансформированные клетки продуцировали большое количество фокусов, ревертанты — значительно меньше.

Уровень продукции вирусных частиц находился в прямом соотношении с уровнем продукции вируоспецифической РНК.

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



С помощью ts-мутантов онкорнавирусов птиц установлено, что репликация и трансформация являются у этой группы саркомно-лейкозного комплекса вирусов независимыми функциями вирусного генома и контролируются разными генами. Ген, несущий информацию для синтеза ревертазы, необходим для проявления обеих функций (Verma et al., 1976). Установлено, что все ts-мутанты RSV с различной эффективностью индуцировали саркомы. Описан мутант, который вызывает саркомы,…

У 68 ts-мутантов SV40 была исследована способность реплицировать ДНК, и на основании комплементационного теста они были разделены на пять групп (Martin et al., 1975). Ts-мутанты группы комплементации А в ранней области транскрипции не способны к инициации синтеза ДНК при 40 °С. Все остальные этапы синтеза ДНК у ts-мутантов группы А эффективно протекали при непермиссивной температуре….

Учитывая сложный комплекс новых биологических свойств, присущих злокачественной клетке, а также тот факт, что столь незначительный генетический материал, привносимый мелкими ДНК-содержащими онковирусами, по-видимому, вряд ли может кодировать все признаки трансформации, вирусный геном, вероятно, является направленным эпигеномным регулятором, изменяющим функционирование генетического аппарата клетки. По-видимому, присутствие вирусного генома достаточно для внегеномных фенотипических изменений, которые могут передаваться и…

Другим геном, функция которого, вероятно, необходима для появления и сохранения характерных для трансформированных клеток свойств плазматической поверхностной мембраны, является ген ts-3. Продукт этого гена, еще окончательно не идентифицированный, в результате изменений, которые он вызывает на клеточной мембране, по-видимому, нарушает контактное ингибирование синтеза клеточной ДНК и изменяет типоингибицию и агглютинацию лектинами. Функция третьего вирусного гена, идентифицированная…

Очевидно, не все изменения, указанные в таблице ниже, являются следствием непосредственной экспрессии генов мелких ДНК-содержащих онковирусов, имеющих в геноме максимум четыре гена, два из которых, по-видимому, ответственны только за синтез вирусных белков. Изменения метаболизма, индуцированные генными функциями онковирусов Онковирус Хозяин Функция и изменение метаболизма ранние и поздние вирусспецифические мРНК Т-антигены TSTA-антигены индукция синтеза клеточной ДНК…