17 мая 2012

Гидролизование вирионной фосфатазы

Установлено, что вирионная фосфатаза способна гидролизовать АТФ до АДФ → АМФ — аденозина, а ЦТФ и УТФ — до цитидина и уридина соответственно.

Среди нуклеотидов, которых около 2000 на одну вирусную частицу, идентифицированы АДФ, ЦТФ, дЦТФ, ГДФ, дАТФ (больше 100 молекул на вирион), ГМФ, УТФ, АМФ, АТФ, ТТФ, УДФ, дТМФ (50 — 100 молекул на вирион). В (вирионах вируса саркомы Рауса выявлены гексокиназа и лактатдегидротеназа, в них нет глюкозо-6-фосфатде-гидротеназы (Mizutani et al., 1971).

Сравнившая специфические активности каждого фермента в целом вирионе и очищенных ядрах, все ферменты можно разделить на две группы:

  1. ДНК-полимеразы, ДНК-лигаза и гексокиназа, которые обладают повышенной активностью в ядрах;
  2. тРНК-нуклеотидилтрансфераза, нуклеозидди-фосфатфосфотрансфераза, лактатдегидрогеназа и АТФаза, имеющие пониженную специфическую активность в ядрах, т. е. эти ферменты не ассоциированы с сердцевиной вириона, а являются частью оболочки.

Очищенные вирионы лейкоза мышей Раушера и миелобластоза птиц обладают протеинкиназной активностью и содержат белки, являющиеся субстратом для действия этого фермента (Tsiapalis, 1977).

Фосфорилирование белков значительно увеличивается, если в систему добавлять протамин. Фосфорилируются главным образом основные структурные полипептиды вириона, входящие в состав нуклеоида. После обработки нейраминидазой и фосфолипазой С вирионы вируса Раушера проявляют гемагглютинирующую активность, ассоциированную с гликопротеином, локализующимся, вероятно, на наружной мембране вириона и имеющим молекулярную массу 93 000.

Итак, в вирионах онкорнавирусов содержится весьма обширный набор белков, обладающих ферментативной активностью. Нельзя исключить, что некоторые ферментативные активности по аналогии с комплексом обратной транскриптазы обусловливаются одним и тем же белком. Предполагают, что не все вирионные ферменты кодируются вирусным геномом, а являются клеточными, включающимися в состав вириона при ассамблировании частиц в цитоплазме, либо адсорбируются на поверхности вирионов.

Вопрос о происхождении вирионных ферментов имеет принципиальное значение, и, вероятно, наиболее реальные пути его разрешения — это проведение исследований на ts-мутантах вирусов, имеющих мутационные повреждения определенного вирионного фермента.

Другим не менее важным аспектом, который также может быть уточнен на моделях ts-мутантов онкорнавирусов, является определение конкретной биологической функции и участия вирионных ферментов в репродукции вирусов.

Считают, что ферменты вирионов онкорнавирусов могут, по-видимому, обеспечивать все этапы репликации вирусного генома, в том числе синтез вирусной ДНК и встраивание этой двуспиральной вирус-специфической ДНК-копии в хромосому клетки. Вирионные ферменты могут, очевидно, участвовать в процессах рекомбинации и репарации.

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Установлено, что представители онкорнавирусов 5 основных субгрупп (А, В, С, D и Е) иммунологически неотличимы по р27 при гомологичном типировании, осуществляемом с помощью радиоиммунологического теста. Напротив, у каждого из трех низкомолекулярных вирусных полипептидов (р19, р15, р12) выявлены типоспецифические детерминанты. Оказалось, что представители субгрупп А, В и Е содержат идентичную генетическую информацию, ответственную за синтез низкомолекулярных…

SSV и GLV приматов относятся ко II классу экзогенных вирусов С-типа, так как оба вируса были изолированы из опухолей обезьян и онкогенны для своих хозяев, т. е. при инъекциях индуцируют неоплазии. Геном этих вирусов не имеет комплементарных последовательностей в ДНК клеток приматов, передается горизонтально и обнаруживается в лимфомах, саркомах и при лейкозах. Ревертазы этих вирусов…

Родственные отношения между различными онкорнавирусами во многих работах исследовались методом молекулярной гибридизации. Чаще всего для этой цели использовали гибридизацию между меченой вирионной РНК и избытком синтезированного в присутствии актиномицина D in vitro 3Н-ДНК-продукта. Уровень образования ДНК — РНК-гибридов контролировали с помощью нуклеазы Sb специфичной в отношении однонитевой ДНК. Оказалось, что все исследованные эндогенные вирусы различных…

Весьма существенно, что при инфекции экзогенными онкорнавирусами во многих системах, например, клеток кошек вирусом FeLV или клеток крыс вирусами приматов, происходит активация эндогенных вирусов. Подобное тестирование синтеза РНК эндогенных вирусов в инфицированных клетках методом молекулярной гибридизации можно использовать для исследования вновь выделенных вирусов. Кроме того, 3Н-ДНК-продукты могут найти широкое применение для обнаружения включения генетического материала…

Масса вирионов онкорнавирусов равна приблизительно 450X106. Вирионы термолабильны и инактивируются эфиром и другими растворителями липидов, так как окружены мембраной, содержащей значительное количество липидов. Например, в состав вириона миелобластоза птиц входит 2,5% РНК, 35% липидов и около 60% белка. Вирус Биттнера содержит 30% липидов, 2% РНК и 68 белка. Фосфолипиды вирионов онкорнавирусов значительно отличаются по составу…