17 мая 2012

ДНК-эндонуклеаза в онкорнавирусах

ДНК-эндонуклеаза, также обнаруженная в онкорнавирусах, не является составной частью вирионов и может быть удалена при дифференцированном скоростном центрифугировании. Наличие этого фермента в онкорнавирусах обусловлено, вероятно, контаминацией микоплазмой.

В высокоочищенных препаратах AMV, RSV, RAVI и ALV, предварительно разрушенных неионными детергентами, присутствует специфическая РНК-метилаза и (N2-гуанин-РНК-метилтрансфераза), роль которой заключается в переносе метильной группы с S-аденозилметионина на гуаниловые основания в молекуле тРНК.

В результате образуется N2-метилгуанин. Кроме описанной метилазной активности, в вирионах RSV выявлена еще одна РНК-метилаза (N2-адени-РНК-метилтрансфераза). Активность РНК-метилазы онкорнавирусов, очевидно, указывает на то, что аберрантное метилирование является важным звеном в неопластическом процессе.

В очищенных вирионах вируса миелобластоза птиц выявлены и тРНК-синтетазы для аргинина, валина, триптофана, лейцина, цистеина и лизина.

Преобладающей по активности является лизил-тРНК-синтетаза (что соответствует обнаруженному большему количеству этого вида тРНК). Обработка вирионов неионным детергентом Р-40 позволила обнаружить в частицах онкорнавирусов амино-ацил-тРНК-синтетазную активность, т. е. фермент, связанный с транскрипцией РНК (Travnicek, Riman, 1973). Представлены данные, свидетельствующие о том, что геном онкорнавирусов контролирует виды тРНК, включающиеся в состав вириона.

Помимо двух классов ферментов, использующих тРНК как субстрат (РНК-метилазы и аминоацилсинтетазы), в вирионе онкорнавирусов птиц и млекопитающих определен и третий фермент этой группы — тРНК-нуклеотидилтрансфераза (Mizutani, Temin, 1976; Thomassen et al., 1976).

Субстратом действия фермента служит 4S РНК, входящая в состав вириона как свободный компонент, но не как связанная с 70S РНК. Не все вирионные тРНК, подобные 4S РНК, могут быть субстратом. Показано, что фермент катализирует присоединение АМФ и ЦМФ к 3´-концу тРНК, образуя последовательность рЦ — рЦ — рАон. Такая достройка, как предполагают, необходима для того, чтобы тРНК могла играть роль затравки для синтеза ДНК на матрице 70S РНК.

Вирионы RSV и вируса лейкоза Раушера содержат нуклеотиды и нуклеотидкиназную активность, в частности, нуклеозидмоно-, нуклеозидди- и нуклеозидтрифосфат-фосфотрансферазы.

Для проявления нуклеотидкиназной активности необходимо разрушение вирионов неионными детергентами и присутствие в системе двухвалентных катионов. Инкубация разрушенных нонидетом Р-40 вирионов RSV с γ- 32Р приводила к появлению неорганического 32Р, а также переносу 32Р к нуклеотидам акценторам дГТФ и дЦТФ.

Поскольку часть 32Р отделяется в форме неорганического фосфата, в вирионе была обнаружена также и фосфатазная активность, причем АТФазная активность, специфичная для других трифосфатов, проявляется только после разрушения вириона.

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Установлено, что представители онкорнавирусов 5 основных субгрупп (А, В, С, D и Е) иммунологически неотличимы по р27 при гомологичном типировании, осуществляемом с помощью радиоиммунологического теста. Напротив, у каждого из трех низкомолекулярных вирусных полипептидов (р19, р15, р12) выявлены типоспецифические детерминанты. Оказалось, что представители субгрупп А, В и Е содержат идентичную генетическую информацию, ответственную за синтез низкомолекулярных…

SSV и GLV приматов относятся ко II классу экзогенных вирусов С-типа, так как оба вируса были изолированы из опухолей обезьян и онкогенны для своих хозяев, т. е. при инъекциях индуцируют неоплазии. Геном этих вирусов не имеет комплементарных последовательностей в ДНК клеток приматов, передается горизонтально и обнаруживается в лимфомах, саркомах и при лейкозах. Ревертазы этих вирусов…

Родственные отношения между различными онкорнавирусами во многих работах исследовались методом молекулярной гибридизации. Чаще всего для этой цели использовали гибридизацию между меченой вирионной РНК и избытком синтезированного в присутствии актиномицина D in vitro 3Н-ДНК-продукта. Уровень образования ДНК — РНК-гибридов контролировали с помощью нуклеазы Sb специфичной в отношении однонитевой ДНК. Оказалось, что все исследованные эндогенные вирусы различных…

Весьма существенно, что при инфекции экзогенными онкорнавирусами во многих системах, например, клеток кошек вирусом FeLV или клеток крыс вирусами приматов, происходит активация эндогенных вирусов. Подобное тестирование синтеза РНК эндогенных вирусов в инфицированных клетках методом молекулярной гибридизации можно использовать для исследования вновь выделенных вирусов. Кроме того, 3Н-ДНК-продукты могут найти широкое применение для обнаружения включения генетического материала…

Из клеток легкого беличьих обезьян изолирован вирус, по морфологии напоминающий онкорнавирусы типа D, т. е. вирус М — PMV (Heberling et al., 1977). Антигенно выделенный вирус отличен от М — PMV. Вероятно, изолированный вирус относится к группе эндогенных ксенотропных вирусов D-типа приматов. Частицы А-типа размером около 75 нм имеют нуклеотид с электронно-прозрачным центром, что придает…