17 мая 2012

Гидролизование РНКазой Н

Показано, что РНКаза Н из вирионов онкорнавирусов птиц может гидролизовать полиУ, полиА и полиА : полиУ.

В отличие от РНКазы Н из Е. coli представляющей собой эндонуклеазу, продуцирующую олигонуклеотиды с 3´-фосфатным и З´-гидроксильным концами, продуктом деградации вирусного фермента являются главным образом динуклеотиды.

Тетрануклеотиды же являются основным продуктом действия клеточной РНКазы Н (Leis et al., 1976).

У большинства онкорнавирусов РНКаза Н ассоциирована с обратной транскриптазой. Вместе с тем, у некоторых вирусов ассоциации РНКазы Н с полимеразой обнаружить не удалось. Ревертаза и РНКаза Н имеют одинаковые потребности в ионах металлов, сульфгидрильных реагентах и оптимуме рН.

Оптимальная концентрация для действия фермента Mg2+ равна 10 — 12 ммоль, Мn2+ — 0,3 ммоль. Активность РНКазы прямо зависит от присутствия полидезоксинуклеотида и не зависит от наличия дезоксинуклеотидов. Антитела к полимеразе AMV нейтрализуют активность обоих ферментов. В то же время антитела к РНКазе Н из Е. coli не подавляют активность РНКазы Н из озирионов AMV.

Очищенный ферментативный комплекс обратной транскриптазы и РНКазы Н из вирионов В-типа MTV имеет коэффициент седиментации 5S, что соответствует молекулярной массе около 100 000 (Dion et al., 1977). РНКаза Н MTV также специфически гидролизует только нить РНК в составе РНК — ДНК-гибрида и по всем свойствам, описанным выше, не отличается от РНКазы Н вирусов С-типа птиц и млекопитающих.

Из вируса миелобластоза птиц выделен белок, который восстанавливает уровень транскрипции РНК, в 8 раз повышает синтез ДНК и вытесняет нити ДНК с РНК в гибридном ДНК — РНК-комплексе.

Этот белок, вероятно, являющийся специфичным для полимеразы AMV, отделяется от вирионной обратной транскриптазы при хроматографии на фосфоцеллюлозе. Данный термочувствительный недиализуемый фактор может блокировать реакции, катализируемые РНК из фагов Qβ и f2.

В вирионах RSV, разрушенных нонидетом Р-40, обнаружены полинуклеотидлигазная активность (ДНК-лигаза) и ДНК-нуклеаза.

Полинуклеотидлигаза, как известно, соединяет разорванные фосфодиэфирные связи в одной из нитей двуспиральной ДНК. Продуктом эндонуклеазной активности являются 5-инозин- и цитозинмоно-фосфаты (ИМФ и ЦМФ).

Активность возрастает при разрушении вириона и снижается при нагревании разрушенного вируса саркомы Рауса. Лигазная активность также обнаруживается в разрушенном вирионе RSV и не требует присутствия экзогенного АТФ.

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



SSV и GLV приматов относятся ко II классу экзогенных вирусов С-типа, так как оба вируса были изолированы из опухолей обезьян и онкогенны для своих хозяев, т. е. при инъекциях индуцируют неоплазии. Геном этих вирусов не имеет комплементарных последовательностей в ДНК клеток приматов, передается горизонтально и обнаруживается в лимфомах, саркомах и при лейкозах. Ревертазы этих вирусов…

Родственные отношения между различными онкорнавирусами во многих работах исследовались методом молекулярной гибридизации. Чаще всего для этой цели использовали гибридизацию между меченой вирионной РНК и избытком синтезированного в присутствии актиномицина D in vitro 3Н-ДНК-продукта. Уровень образования ДНК — РНК-гибридов контролировали с помощью нуклеазы Sb специфичной в отношении однонитевой ДНК. Оказалось, что все исследованные эндогенные вирусы различных…

Весьма существенно, что при инфекции экзогенными онкорнавирусами во многих системах, например, клеток кошек вирусом FeLV или клеток крыс вирусами приматов, происходит активация эндогенных вирусов. Подобное тестирование синтеза РНК эндогенных вирусов в инфицированных клетках методом молекулярной гибридизации можно использовать для исследования вновь выделенных вирусов. Кроме того, 3Н-ДНК-продукты могут найти широкое применение для обнаружения включения генетического материала…

Установлено, что представители онкорнавирусов 5 основных субгрупп (А, В, С, D и Е) иммунологически неотличимы по р27 при гомологичном типировании, осуществляемом с помощью радиоиммунологического теста. Напротив, у каждого из трех низкомолекулярных вирусных полипептидов (р19, р15, р12) выявлены типоспецифические детерминанты. Оказалось, что представители субгрупп А, В и Е содержат идентичную генетическую информацию, ответственную за синтез низкомолекулярных…

Масса вирионов онкорнавирусов равна приблизительно 450X106. Вирионы термолабильны и инактивируются эфиром и другими растворителями липидов, так как окружены мембраной, содержащей значительное количество липидов. Например, в состав вириона миелобластоза птиц входит 2,5% РНК, 35% липидов и около 60% белка. Вирус Биттнера содержит 30% липидов, 2% РНК и 68 белка. Фосфолипиды вирионов онкорнавирусов значительно отличаются по составу…