15 мая 2012

Радиоиммунный тест

Используя чувствительный радиоиммунный тест, Mizutani и Temin (1976) показали, что ревертазы вирусов саркомно-лейкозного комплекса птиц и группы ретикулоэндотелиоза, которые по данным молекулярной гибридизации неродственны, имеют некоторое антигенное сходство.

Перекрестные иммунологические реакции протекали и с клеточными ДНК-полимеразами. На этом основании авторы предполагают, что ревертазы онкорнавирусов обеих групп имеют клеточное происхождение.

Подробно охарактеризована ДНК-полимераза, ассоциированная с интерплазматическими частицами А-типа мышей (Kohno, Tanaka, 1977).

Уровень эндогенной и экзогенной активности пропорционален концентрации вирусного белка. Оптимум действия фермента при рН 7,3, концентрации NaCl 90 ммоль, ДТТ 3 — 4 ммоль, Mg2+ 2 — 3 ммоль. В эндогенной реакции Мn2+ в 2 раза менее эффективен, чем Mg2+, но в экзогенной реакции, катализируемой поли (рЦ): олиго (дГ), Мn2+ вообще неактивен.

Вирионная РНКаза Н представляет собой экзонуклеазу, осуществляющую деградацию РНК в РНК — ДНК-гибриде как от 5´-конца к З´-концу, так и в обратном направлении (Leis et al., 1976).

Одноцепочечную РНК, одно- и двухцепочечную ДНК, а также ДНК в составе РНК — ДНК-гибрида РНКаза Н не разрушает, т. е. она гидролизует рибонуклеотидную цепь во всех гибридных молекулах, за исключением (3Н-поли У) : (оголи дА).

Продуктом реакции являются олигонуклеотиды длиной в 2 — 8 нуклеотидов. Эти данные позволяют предполагать, что РНКаза Н играет существенную роль в процессе освобождения ДНК из РНК — ДНК-гибридов в полимеразной реакции. Затем одноцепочечная ДНК может использоваться для синтеза двухцепочечной ДНК.

Согласно другому предположению, образующаяся молекула, состоящая из РНК — ДНК-гибрида и освобожденных коротких фрагментов одноцепочечной ДНК, инкорпорируется в хромосому клетки, где РНКаза Н ядра (эндо-нуклеаза) разрушает внутренние последовательности РНК в РНК — ДНК-гибриде с последующей репарацией ДНК и образованием дуплекса ДНК.

Так как ДНК-продукт на матрице 70S-PHK составляет 4 — 12S, то описываемая модель исключает необходимость интеграции многих мелких фрагментов вирусных ДНК с ДНК хромосом клетки.

Однако поскольку в настоящее время нет твердых доказательств в пользу того, что вирионные РНКазные Н-активности не являются контаминацией со стороны клеток хозяина, к предполагаемому участию РНКазы Н в процессах интеграции вирусного генома с клеточным следует относиться пока весьма осторожно.


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Установлено, что представители онкорнавирусов 5 основных субгрупп (А, В, С, D и Е) иммунологически неотличимы по р27 при гомологичном типировании, осуществляемом с помощью радиоиммунологического теста. Напротив, у каждого из трех низкомолекулярных вирусных полипептидов (р19, р15, р12) выявлены типоспецифические детерминанты. Оказалось, что представители субгрупп А, В и Е содержат идентичную генетическую информацию, ответственную за синтез низкомолекулярных…

SSV и GLV приматов относятся ко II классу экзогенных вирусов С-типа, так как оба вируса были изолированы из опухолей обезьян и онкогенны для своих хозяев, т. е. при инъекциях индуцируют неоплазии. Геном этих вирусов не имеет комплементарных последовательностей в ДНК клеток приматов, передается горизонтально и обнаруживается в лимфомах, саркомах и при лейкозах. Ревертазы этих вирусов…

Родственные отношения между различными онкорнавирусами во многих работах исследовались методом молекулярной гибридизации. Чаще всего для этой цели использовали гибридизацию между меченой вирионной РНК и избытком синтезированного в присутствии актиномицина D in vitro 3Н-ДНК-продукта. Уровень образования ДНК — РНК-гибридов контролировали с помощью нуклеазы Sb специфичной в отношении однонитевой ДНК. Оказалось, что все исследованные эндогенные вирусы различных…

Весьма существенно, что при инфекции экзогенными онкорнавирусами во многих системах, например, клеток кошек вирусом FeLV или клеток крыс вирусами приматов, происходит активация эндогенных вирусов. Подобное тестирование синтеза РНК эндогенных вирусов в инфицированных клетках методом молекулярной гибридизации можно использовать для исследования вновь выделенных вирусов. Кроме того, 3Н-ДНК-продукты могут найти широкое применение для обнаружения включения генетического материала…

Масса вирионов онкорнавирусов равна приблизительно 450X106. Вирионы термолабильны и инактивируются эфиром и другими растворителями липидов, так как окружены мембраной, содержащей значительное количество липидов. Например, в состав вириона миелобластоза птиц входит 2,5% РНК, 35% липидов и около 60% белка. Вирус Биттнера содержит 30% липидов, 2% РНК и 68 белка. Фосфолипиды вирионов онкорнавирусов значительно отличаются по составу…