14 мая 2012

Комплекс обратная транскриптаза — РНКаза Н из вируса лейкоза Френд (Fr — MuLV)

Комплекс обратная транскриптаза — РНКаза Н из вируса лейкоза Френд (Fr — MuLV) состоит из полипептида с молекулярной массой 84 000. После мягкой протеазной обработки ферментативного комплекса Fr — MuLV образуется несколько дополнительных полипептидов с молекулярными массами 78 000, 68 000 и 60 000. Свойства комплекса после ограниченного протеолиза напоминают свойства α-субъединицы ревертазы AMV, которая образуется при такой же обработке β-субъединицы ревертазы AMV.

Оба фермента не транскрибируют вирусной РНК с эндогенной затравкой, не катализируют, по-видимому, синтеза двуспиральной ДНК, так как синтез становится нечувствителен к актиномицину D, а РНКаза Н в таком комплексе ведет себя как непроцессивная экзонуклеаза (Moelling, 1976).

Из одной субъединицы состоят также молекулы ревертазы из вирусов лейкоза Раушера (ферменты с молекулярными массами 70 000, 90 000 и 26 000), лейкоза кошек (70 000), сарком шерстистых обезьян (70 000), вируса Мезона — Пфайзера (120 000) и MTV (98 000).

С помощью электрофореза в полиакриламидном геле показано, что молекула ревертазы из MTV состоит из двух основных полипептидов с массой 85 000 и 50 000 и двух минорных с массой 18 000 и 14 000. Молекулярная масса активной формы обратной транскриптазы из MTV, определенная методом седиментации в глицерине, равна 108 000, а коэффициент седиментации — 5,6S (Marcus et al., 1976).

В очищенном препарате ревертазы R — MuLV не обнаружена активность ДНКазы, но присутствовала активность РНКазы Н (Modak, Marcus, 1977). Таким образом, выявлены существенные различия в структуре ДНК-полимераз из вирусов птиц и млекопитающих.

Методом пептидных карт установлено, что почти все пептиды α-субъединицы ревертазы AMV присутствуют и на пептидных картах β-субъединицы. Аналогичная ситуация наблюдалась и в отношении обратной транскриптазы RSV.

Кроме того, пептидные карты α- и β-субъединиц ревертазы AMV оказались очень близки к пептидным картам аналогичных субъединиц обратной транскриптазы RSV. Электрофорез в полиакриламидном геле солюбилизированных белков цельного AMV показал, что в состав вирионов входят обе субъединицы ревертазы и белки фермента составляют около 2% от общего количества белка вирусных частиц.

Предполагают, что α-субъединица молекулы ревертазы образуется из β-субъединицы путем специфического протеолитического расщепления.

Затем было установлено, что обратные транскиптазы из С-типов вирусов птиц, млекопитающих и приматов обладали весьма характерными серологическими специфичностями. Антисыворотка к ревертазе птичьих онкорнавирусов специфически ингибировала обратнотранскриптазную активность вирусов С-типа птиц и не влияла на активность фермента из онкорнавирусов мышей, крыс, хомячков, кошек, вируса Висна и «пенящего» вируса (FV).

Показано, что ревертаза RSV не имеет общих антигенных детерминант ни с одним из вирусных белков, сходна с обратной транскриптазой AMV и ферменты обоих вирусов несут типоспецифические детерминанты (Panet, 1977). Обратные транскриптазы онкорнавирусов млекопитающих иммунологически родственны, но не идентичны.

Ревертаза из вирионов В-типа мышей не инактивировалась антисывороткой к обратной транскриптазе вирусов С-типа.

Антитела против ревертазы из вируса кошек подавляли полимеразную активность вирусов саркомнолейкозного комплекса мышей, кошек и вируса лейкоза хомячков и не блокировали обратнотранскриптазную реакцию онкорнавирусов птиц, MTV и вируса С-типа обезьян. Следовательно, ревертазы онкорнавирусов обладают видовой и межвидовой антигенностью.

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Установлено, что представители онкорнавирусов 5 основных субгрупп (А, В, С, D и Е) иммунологически неотличимы по р27 при гомологичном типировании, осуществляемом с помощью радиоиммунологического теста. Напротив, у каждого из трех низкомолекулярных вирусных полипептидов (р19, р15, р12) выявлены типоспецифические детерминанты. Оказалось, что представители субгрупп А, В и Е содержат идентичную генетическую информацию, ответственную за синтез низкомолекулярных…

SSV и GLV приматов относятся ко II классу экзогенных вирусов С-типа, так как оба вируса были изолированы из опухолей обезьян и онкогенны для своих хозяев, т. е. при инъекциях индуцируют неоплазии. Геном этих вирусов не имеет комплементарных последовательностей в ДНК клеток приматов, передается горизонтально и обнаруживается в лимфомах, саркомах и при лейкозах. Ревертазы этих вирусов…

Родственные отношения между различными онкорнавирусами во многих работах исследовались методом молекулярной гибридизации. Чаще всего для этой цели использовали гибридизацию между меченой вирионной РНК и избытком синтезированного в присутствии актиномицина D in vitro 3Н-ДНК-продукта. Уровень образования ДНК — РНК-гибридов контролировали с помощью нуклеазы Sb специфичной в отношении однонитевой ДНК. Оказалось, что все исследованные эндогенные вирусы различных…

Весьма существенно, что при инфекции экзогенными онкорнавирусами во многих системах, например, клеток кошек вирусом FeLV или клеток крыс вирусами приматов, происходит активация эндогенных вирусов. Подобное тестирование синтеза РНК эндогенных вирусов в инфицированных клетках методом молекулярной гибридизации можно использовать для исследования вновь выделенных вирусов. Кроме того, 3Н-ДНК-продукты могут найти широкое применение для обнаружения включения генетического материала…

Масса вирионов онкорнавирусов равна приблизительно 450X106. Вирионы термолабильны и инактивируются эфиром и другими растворителями липидов, так как окружены мембраной, содержащей значительное количество липидов. Например, в состав вириона миелобластоза птиц входит 2,5% РНК, 35% липидов и около 60% белка. Вирус Биттнера содержит 30% липидов, 2% РНК и 68 белка. Фосфолипиды вирионов онкорнавирусов значительно отличаются по составу…