14 мая 2012

Опыты на модели вируса лейкоза Раушера

В опытах на модели вируса лейкоза Раушера обнаружено, что сразу же после формирования из своих предшественников gp69/71 появляется на наружной поверхности клеток, а р30, р15 и р12 покидают клетку как компоненты почкующегося вириона (Van Zaan et al., 1976). Поэтому эти белки выявляются внутри клеток в очень небольших количествах; р15 (Е) обнаружен как внутри клеток, так и на их наружной поверхности.

Исследован механизм превращения предшественника гликопротеида MSV — MuLV в инфицированных клетках.

Антисыворотка к вирусному гликопротеиду осаждает из клеточного экстракта два полипептида с молекулярными массами 80 000 и 69 000 — 71 000 (Witte et al., 1977).

Компонент gp80 находится в клетке ассоциированным с грубым эндоплазматическим ретикулумом и пластинчатым комплексом, оттуда он через клеточную цитоплазматическую сеть транспортируется в клеточную мембрану.

Процесс перехода предшественника в оболочку клеток сопровождается процессингом его на конечные продукты — gp-69/71 и р14, образующие в клеточной мембране гетеродимер р14 — gp69/71, ковалентно связанный через дисульфидную связь (или связи). Считают, что именно этот гетеродимер является тем белковым продуктом, который включается в почкующийся вирион.

Анализ экспрессии онкорнавирусных белков на поверхности лейкозных клеток мышей линии AKR показал, что антисыворотка к gp70 осаждает гликопротеид с молекулярной массой 68 000 — 75 000 (Ledbetter et al., 1977).

Антисыворотки к внутренним белкам осаждают гликопротеиды с молекулярными массами 85 000 и 95 000, причем антисыворотка к р10 осаждает только gp95, но не gp85, а антисыворотка к р30 и р12 — оба гликопротеида. Полагают, что gp85 не содержит детерминант белка р10, a gp95 является предшественником gp85. Антисыворотка к р15 не осаждала поверхностный гликопротеид — предшественник внутренних белков.

На поверхности лейкозных клеток присутствуют как gp70, так и gp85 и gp95, а оболочки нормальных тимоцитов мышей линии AKR содержат только gp70. С помощью конкурентного радиоиммунологического теста и картирования пептидов, получаемых в результате гидролиза трипсином, проведен сравнительный анализ gp70, выявляемых на поверхности клеток мышей различных линий (Kennel, 1977).

По данным пептидного анализа, gp70 из NZB и NZW в большей степени похож на лабораторный штамм MuLV, чем gp70 AKR, но в то же время каждый из этих вирусов характеризуется уникальным пептидным составом для gp70.


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Установлено, что представители онкорнавирусов 5 основных субгрупп (А, В, С, D и Е) иммунологически неотличимы по р27 при гомологичном типировании, осуществляемом с помощью радиоиммунологического теста. Напротив, у каждого из трех низкомолекулярных вирусных полипептидов (р19, р15, р12) выявлены типоспецифические детерминанты. Оказалось, что представители субгрупп А, В и Е содержат идентичную генетическую информацию, ответственную за синтез низкомолекулярных…

SSV и GLV приматов относятся ко II классу экзогенных вирусов С-типа, так как оба вируса были изолированы из опухолей обезьян и онкогенны для своих хозяев, т. е. при инъекциях индуцируют неоплазии. Геном этих вирусов не имеет комплементарных последовательностей в ДНК клеток приматов, передается горизонтально и обнаруживается в лимфомах, саркомах и при лейкозах. Ревертазы этих вирусов…

Родственные отношения между различными онкорнавирусами во многих работах исследовались методом молекулярной гибридизации. Чаще всего для этой цели использовали гибридизацию между меченой вирионной РНК и избытком синтезированного в присутствии актиномицина D in vitro 3Н-ДНК-продукта. Уровень образования ДНК — РНК-гибридов контролировали с помощью нуклеазы Sb специфичной в отношении однонитевой ДНК. Оказалось, что все исследованные эндогенные вирусы различных…

Весьма существенно, что при инфекции экзогенными онкорнавирусами во многих системах, например, клеток кошек вирусом FeLV или клеток крыс вирусами приматов, происходит активация эндогенных вирусов. Подобное тестирование синтеза РНК эндогенных вирусов в инфицированных клетках методом молекулярной гибридизации можно использовать для исследования вновь выделенных вирусов. Кроме того, 3Н-ДНК-продукты могут найти широкое применение для обнаружения включения генетического материала…

Масса вирионов онкорнавирусов равна приблизительно 450X106. Вирионы термолабильны и инактивируются эфиром и другими растворителями липидов, так как окружены мембраной, содержащей значительное количество липидов. Например, в состав вириона миелобластоза птиц входит 2,5% РНК, 35% липидов и около 60% белка. Вирус Биттнера содержит 30% липидов, 2% РНК и 68 белка. Фосфолипиды вирионов онкорнавирусов значительно отличаются по составу…