8 мая 2012

Необработанные вирионы онкорнавирусов В-типа

Необработанные вирионы онкорнавирусов В-типа содержат 5 основных белков, два из которых являются гликопротеидами (gp52 и gp34), три неглюколизированных белка (р28, р18 и р12) и 6 минорных компонентов (Sarkar et al., 1976). При обработке твином-эфиром от MTV-частиц отделяются характерные структуры (розетки), состоящие из стебля и головки.

В розетках с помощью электрофореза в полиакриламидном геле выявляются 4 гликопротеида: три основных gp34, gp55 и gp68) и один дополнительный (gp90). Предполагают, что головка розеток состоит из gp55.

Компонент gp34 ассоциирован с вирусной мембраной и, вероятно, локализован внутри двойного мембранного слоя. При анализе материала, освобождающегося из вирионов при обработке кислотой (0,05 NНО, 4 °С, 20 мин), обнаруживаются два гликопротеида — gp55 я gp69.

Полипептидный состав фракции, устойчивой к кислоте, более сложен: основным белком является gp34, определяются два минорных белка в зоне белков с молекулярной массой 50 000 — 60 000, один из которых является гликопротеидом.

Основной компонент группового антигена вириона MTV gp52 содержит 10 — 16% углеводов. По-видимому, он локализован на поверхности вирусной частицы и составляет 25% всего белка.

Кроме gp52, на поверхности вириона MTV присутствует еще несколько гликопротеидов (gpl40, gp90 и gp68).

Эти различия, вероятно, связаны с тем, что в более ранних исследованиях использовался MTV, полученный в культуре ткани, a Sheffield и соавт. (1976) получили его из молока. Гликопротеид gpl40 под действием трипсина превращается в полипептид с молекулярной массой 125 000, gp68 вообще удаляется из вирусной частицы, a gp52 разрезается на два белка — р36 и р23. Таким образом, различные гликопротеиды на поверхности MTV чувствительны к действию трипсина, который вызывает разрыв в полипептидной цепи без изменения конфигурации молекулы. Такие молекулы остаются связанными с частицей, и их присутствие не интерферирует с биологической или антигенной экспрессией вирусных функций.

Белок р28 также имеет групповые антигенные детерминанты. Общие антигены у gp52 и р28 не обнаружены.

Эти белки также не имели общих антигенных детерминант с р30 вирусов С-типа млекопитающих. Определен полный аминокислотный состав MTV gp52 и MTV p28. N-Концевая аминокислота р28 — пролин, а у gp52 это либо лизин, либо серии, либо глутаминовая кислота.

Среди основных белков MTV gp52 и р36 ассоциированы с ядром, р28 и р14 — с оболочкой вириона, а локализация р10 пока точно не установлена (Teramoto et al., 1977). ДНК-связывающий белок с молекулярной массой 12 500 также обнаружен в препаратах MTV.

Этот протеин был вторым из быстромигрирующих белковых компонентов вириона и антигенно отличался от белка р10 мышиных вирусов С-типа (Long et al., 1977).

Вирион вируса Мезона — Пфайзера (М — PMV) содержит три основных полипептида р65, р41 и р27, три белка с молекулярными массами от 12000 до 14 500 и два минорных полипептида р20 и р22. Антисыворотка к разрушенному вирусу практически полностью осаждала р27 и р15, которые оказались кислыми белками. Антисыворотки против различных РНК-содержащих онкогенных вирусов приматов не содержали антител, реагирующих с р27 и р 15.

В высокочувствительном радиоиммунологическом тесте также не обнаружено иммунологического родства с полипептидами онкорнавирусов В- и С-типов млекопитающих.

Белок р27 M-PMV, выращенного в трех различных культурах клеток, обладал идентичной антигенностью.

Кроме того, только клетки, инфицированные М — PMV, характеризовались значительным синтезом р27.

Эти факты могут свидетельствовать о том, что р27 является вирускодируемым белком (Schochetman et al., 1976).

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Установлено, что представители онкорнавирусов 5 основных субгрупп (А, В, С, D и Е) иммунологически неотличимы по р27 при гомологичном типировании, осуществляемом с помощью радиоиммунологического теста. Напротив, у каждого из трех низкомолекулярных вирусных полипептидов (р19, р15, р12) выявлены типоспецифические детерминанты. Оказалось, что представители субгрупп А, В и Е содержат идентичную генетическую информацию, ответственную за синтез низкомолекулярных…

SSV и GLV приматов относятся ко II классу экзогенных вирусов С-типа, так как оба вируса были изолированы из опухолей обезьян и онкогенны для своих хозяев, т. е. при инъекциях индуцируют неоплазии. Геном этих вирусов не имеет комплементарных последовательностей в ДНК клеток приматов, передается горизонтально и обнаруживается в лимфомах, саркомах и при лейкозах. Ревертазы этих вирусов…

Родственные отношения между различными онкорнавирусами во многих работах исследовались методом молекулярной гибридизации. Чаще всего для этой цели использовали гибридизацию между меченой вирионной РНК и избытком синтезированного в присутствии актиномицина D in vitro 3Н-ДНК-продукта. Уровень образования ДНК — РНК-гибридов контролировали с помощью нуклеазы Sb специфичной в отношении однонитевой ДНК. Оказалось, что все исследованные эндогенные вирусы различных…

Весьма существенно, что при инфекции экзогенными онкорнавирусами во многих системах, например, клеток кошек вирусом FeLV или клеток крыс вирусами приматов, происходит активация эндогенных вирусов. Подобное тестирование синтеза РНК эндогенных вирусов в инфицированных клетках методом молекулярной гибридизации можно использовать для исследования вновь выделенных вирусов. Кроме того, 3Н-ДНК-продукты могут найти широкое применение для обнаружения включения генетического материала…

Масса вирионов онкорнавирусов равна приблизительно 450X106. Вирионы термолабильны и инактивируются эфиром и другими растворителями липидов, так как окружены мембраной, содержащей значительное количество липидов. Например, в состав вириона миелобластоза птиц входит 2,5% РНК, 35% липидов и около 60% белка. Вирус Биттнера содержит 30% липидов, 2% РНК и 68 белка. Фосфолипиды вирионов онкорнавирусов значительно отличаются по составу…