7 мая 2012

Исследования индивидуальных белков вириона онкорнавирусов

Современный метод исследования индивидуальных белков вириона онкорнавирусов включает предварительную деструкцию вирусных частиц с последующим разделением белков разными способами.

Среди последних можно указать на фильтрацию в гуанидин-HCl (наиболее корректные результаты получены для белков с молекулярной массой 10 — 30X103), электрофорез в полиакриламидном геле (наиболее четкие данные получены для белков с молекулярной массой 30 — 100Х103), ионообменную хроматографию.

Ионообменная хроматография в сочетании с предварительной деструкцией вирионов, которая достигается путем многократных замораживаний — оттаиваний, — наиболее оптимальный метод для получения высокой степени очистки вирусных белков с сохранением их антигенной активности.

В настоящее время с помощью современных методов у онкорнавирусов С-типа птиц выделены 7 белков: основной гликопротеид, связанный одной или более дисульфидной связью в агрегированную структуру, которая содержит по одной молекуле gp 85ts и gp 37ts; основной антигенный компонент gs-комплекса р27 gs; три неглюколизированных белка с подгрупповой антигенной специфичностью (р19 sub-gs, pl5 sub-gs и р12 sub-gs) и р10. Ковалентная связь между gp85ts и gp37ts в гликопротеидном комплексе образуется внутри клеток до освобождения вируса в культуральную среду (Leamnson, Halpern, 1976).

Таким образом, 4 обычных белка, характеризующиеся групповой и подгрупповой антигенностью, ассоциированы с вирусным нуклеоидом и два гликопротеида, обладающие ts-специфичностью, локализованы на поверхности вириона.

Углеводный компонент гликопротеидов птичьих онкорнавирусов составляет около 20% массы и представлен глюкозамином, маннозой, галактозой, фукозой и сиаловой кислотой.

Установлено, что gp85, обладающий свойствами сильно кислого белка, наряду с типовой антигенностью имеет групповые антигенные детерминанты, правда, в значительно меньшем количестве. В противоположность этому у каждого из трех низкомолекулярных полипептидов (р19, р15 и р12) выявлены типоспецифические детерминанты. По этим критериям онкорна-вирусы С-типа птиц сходны с вирусами С-типа мышей, у которых низкомолекулярные белки также обладают ts-активностью. Следует отметить, что у разных белков антигенность типовых и групповых детерминант различна.

С помощью конкурентного радиоиммунологического теста показано, что представители 5 основных субгрупп онкорнавирусов птиц иммунологически неотличимы от AMVp27gs по этим белкам. Вместе с тем оказалось, что вирусы С- и D-субгрупп по низкомолекулярным белкам (р19, р15 и р12) отличаются от вирусов субгрупп А, В и Е при гомологичном типировании с помощью радиоиммунологического метода.

Следовательно, представители субгрупп А, В и Е несут идентичную генетическую информацию, ответственную за синтез вирусных низкомолекулярных полипептидов.

Из ALV подтипа А и RSV-штаммов подгрупп В и С получены рекомбинанты, которые в 14 из 17 случаев имели р19 RSV. У рекомбинантов обнаружен ген поверхностного гликопротеида подгруппы А и саркоматозный ген вирусов подгрупп В и С (Hayman, Vogt, 1976).


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Установлено, что представители онкорнавирусов 5 основных субгрупп (А, В, С, D и Е) иммунологически неотличимы по р27 при гомологичном типировании, осуществляемом с помощью радиоиммунологического теста. Напротив, у каждого из трех низкомолекулярных вирусных полипептидов (р19, р15, р12) выявлены типоспецифические детерминанты. Оказалось, что представители субгрупп А, В и Е содержат идентичную генетическую информацию, ответственную за синтез низкомолекулярных…

SSV и GLV приматов относятся ко II классу экзогенных вирусов С-типа, так как оба вируса были изолированы из опухолей обезьян и онкогенны для своих хозяев, т. е. при инъекциях индуцируют неоплазии. Геном этих вирусов не имеет комплементарных последовательностей в ДНК клеток приматов, передается горизонтально и обнаруживается в лимфомах, саркомах и при лейкозах. Ревертазы этих вирусов…

Родственные отношения между различными онкорнавирусами во многих работах исследовались методом молекулярной гибридизации. Чаще всего для этой цели использовали гибридизацию между меченой вирионной РНК и избытком синтезированного в присутствии актиномицина D in vitro 3Н-ДНК-продукта. Уровень образования ДНК — РНК-гибридов контролировали с помощью нуклеазы Sb специфичной в отношении однонитевой ДНК. Оказалось, что все исследованные эндогенные вирусы различных…

Весьма существенно, что при инфекции экзогенными онкорнавирусами во многих системах, например, клеток кошек вирусом FeLV или клеток крыс вирусами приматов, происходит активация эндогенных вирусов. Подобное тестирование синтеза РНК эндогенных вирусов в инфицированных клетках методом молекулярной гибридизации можно использовать для исследования вновь выделенных вирусов. Кроме того, 3Н-ДНК-продукты могут найти широкое применение для обнаружения включения генетического материала…

Масса вирионов онкорнавирусов равна приблизительно 450X106. Вирионы термолабильны и инактивируются эфиром и другими растворителями липидов, так как окружены мембраной, содержащей значительное количество липидов. Например, в состав вириона миелобластоза птиц входит 2,5% РНК, 35% липидов и около 60% белка. Вирус Биттнера содержит 30% липидов, 2% РНК и 68 белка. Фосфолипиды вирионов онкорнавирусов значительно отличаются по составу…