Геном онкорнавирусов и онкогенез

Установлено, что каждая ДНК-полимераза максимальной активностью обладает при использовании определенного типа синтетических полинуклеотидных матриц, причем активность каждого фермента при участии оптимальной для него матрицы оказывалась приблизительно в 15 раз выше активности остальных обратных транскриптаз. Таким образом, применение синтетических матриц типа поли-рА: олито-дТ12-18, с одной стороны, позволили увеличить чувствительность полимеразной реакции, а с другой, использовать их…

Необходимость ДНК-полимер азы в проявлении инфекционности онкорнавирусов и в опухолевой трансформации, индуцированной ими, весьма убедительно обоснована в опытах на разных клонах RSVα0, дефектных по ревертазе (Н. Hanafusa, Т. Hanafusa, 1971). У штамма Hanafusa — Hanafusa отсутствовали обе активности фермента (РНК- и ДНК-зависимых ДНК-полимераз), а в вирионах штамма Robinson-Robinson — активность только РНК-зависимой ДНК-полимеразы. Важно подчеркнуть,…

Получена ДНК-копия нуклеотидных последовательностей, присутствующих только в саркомных и отсутствующих в лейкозных вирусах, т. е., вероятно, ответственная за злокачественную трансформацию ДНК sarc с размером около 2600 нуклеотидов. Все штаммы RSV содержали sarc-последовательности, которые отсутствовали в РНК вирусов лейкозов птиц и сарком мышей, а также в геноме ДНК-содержащих онкорнавирусов. Sarc-специфические последовательности обнаружены и в нормальных клетках…

Показано, что в нормальных клетках мышей линии NIH нет последовательностей, специфичных для эндогенного вируса Gross — AKR. После инфекции в таких клетках происходит интеграция 3 — 4 копий этих последовательностей на гаплоидный геном клетки (Chattopadhyay et al., 1976). В нормальных клетках AKR последовательности Gross — AKR присутствуют в количестве 3 — 4 копий на гаплоидный…

На основании имеющегося экспериментального материала была предложена следующая модель синтеза ДНК. Начальный этап ДНК происходит в репликационном комплексе, содержащем молекулы ДНК, связанные водородными связями с молекулами вирусной РНК. Каждая молекула ДНК вытесняется как однонитевая молекула (минус-нить) в результате синтеза последующей минус-нити ДНК. Синтез двуспиральной ДНК следует за синтезом односпиральной ДНК, которая является матрицей для синтеза…

Изложенные выше факты позволяют представить общие начальные этапы процесса репликации онкорнавирусов и трансформации, индуцированной ими. Вирусспецифическая ДНК синтезируется обратной транскриптазой в цитоплазме пермиссивных клеток в течение первых 9 ч инфекции, а в непермиссивной системе синтез продолжается до 12 ч. Синтез ДНК, направляемый РНК-зависимой ДНК-полимеразой разрушенного RSV, инициируется in vitro путем ковалентного присоединения дезокси-нуклеотидов к 3´-концу…

Исследование распределения вирусспецифических последовательностей в ДНК клеток различных органов незараженных и зараженных AMV цыплят показало, что все нормальные ткани содержат примерно равные количества ДНК, комплементарной 35S РНК AMV, что соответствует 1 — 3 копиям на гаплоидный клеточный геном. У зараженных цыплят все ткани можно разделить на 3 категории: мышцы и мозг, в которых концентрация вирусной…

Для обратной транскриптазы, как и всякого фермента, осуществляющего полимеризацию нуклеотидов, требуется наличие в полимеразной смеси компонентов, из которых прежде всего необходима матрица. В данной системе различают три типа матриц. Первый тип — эндогенная матрица. Этот термин применяют только тогда, когда в качестве матрицы используют вирионную высокомолекулярную РНК, а в качестве фермента — разрушенный онкорнавирус. Второй…

Уровень активности ревертазы пропорционален количеству вирусных частиц. Минимальная активность (по числу включенных пикомолей дГТФ на одну вирусную частицу за 1 ч) составила 28,1±4,2Х10-7 для AMV и 1,1±0,2X10-7 для Ra — MuLV (Liebes et al., 1976). Очищенная полимераза AMV служит субстратом в реакции фосфорилирования, катализируемой очищенной протеинкиназой из того же источника (Tsiapalis, 1977). Степень фосфорилирования регулирует…

«Ранний» (на 20-й минуте реакции) эндогенный продукт, как показал его анализ, представляет собой ДНК, ассоциированную с 60 — 70S-вирионной РНК. С помощью обработки ферментами и равновесного центрифугирования в градиенте плотности Cs2SO4 установлено, что основная 8 — 10S-фракция на 12-й минуте реакции содержала примерно равное количество односпиральной ДНК (в зоне с плотностью 1,42 — 1,44 г/мл,…

Обнаружено, что ревертаза AMV способна транскрибировать вирусный геном в ДНК независимо от того, где локализована затравка три-тРНК или олиго-(дТ), на 5´-конце вирусной РНК или на 3´-конце молекулы (Collett Faras, 1977). Это означает, что ДНК-транскрипты, инициируемые на три-тРНК-затравке на 5´-конце вирусной РНК, содержат также последовательности, присутствующие и в других частях генома и, возможно, на 3´-конце. Darlix…

Проведена детекция неинфекционных фрагментов ДНК из клеток, зараженных вирусом лейкоза птиц, с помощью спасения маркера. Этот метод оказался менее эффективным, чем тест на инфекционную ДНК RSV (Cooper, Castellot, 1977). Установлено, что генетические маркеры для ДНК-полимеразы (pol) и оболочки (env) связаны и локализованы на одном и том же Е. coli RI-фрагменте ДНК из зараженных RSV-клеток. Успешно…