28 июня 2012

Количественные определения в опытах с использованием импульсной метки

Количественные определения в опытах с использованием импульсной метки, а также данные, полученные с ингибиторами белкового синтеза и канаванином, говорят о том, что протеолитическое расщепление Рrlа + b является первым путем образования промежуточных предшественников обратной транскриптазы — PrRTl, 2 и 3.

Вместе с тем неясно, играет ли какую-то роль этот путь расщепления в образовании продуктов gag-гена. Представленные данные свидетельствуют о том, что основная масса выявляемых предшественников — продуктов gag-гена (Рr3 и Рr4) образуется с помощью механизма, который не включает разрезание переформированного Рr1а + b.

Полученные факты объясняются моделью, согласно которой трансляция начинается с одной точки инициации и приводит либо к образованию только продукта gag-гена, либо, гораздо реже, к образованию общего gag — роl-продукта, что является следствием блокировки участка терминации на конце gag-гена.

Установлено, что синтез вирусных белков-предшественников осуществляется по трем путям, в G1, S- и G2-фазах клеточного цикла (Naso, Brown, 1977). Во время этих периодов синтез вирусных белков составлял от 4,5 до 5,5% синтеза тотальных клеточных белков.

G1-пути синтеза белковых предшественников не нуждается в синтезе вирусной РНК, а два других зависят от присутствия вновь синтезируемой вирусной РНК.

Измерение уровня внеклеточного и внутриклеточного р30 в процессе 30-минутного и 24-часового периодов вытеснения метки (35S-метионина) показало, что основная масса вновь синтезированного р30 в клетках опухолей вилочковой железы кошек, перманентно инфицированных FeLV, включается во внеклеточный вирус (Okasinski, Velicer, 1976). При анализе триптических гидролизатов р60 и р30 выявлено, что 13 и 15 пептидов, обнаруженных в р30, определяются и в р60, т. е. р60 является внутриклеточным предшественником р30 FeLV.

При выращивании клеток в присутствии аналога пролина b-азотидил-2-карбоксиловой кислоты, кроме Рr60, выявляется и Рr70.

При сравнении триптических пептидов Рr70 и Рr60 со структурными белками вириона FeLV обнаружено, что оба эти белка-предшественника содержат р30, р15, р11 и р10 FeLV.

В Рr60 отсутствует только пептид р11. Показано, что образование структурных пептидов FeLV происходит в следующем порядке: p11 — р15 — р10 — р30 (Okasinski, Velicer, 1977).

Представленные данные указывают на то, что мелкие структурные белки вириона синтезируются как часть белка-предшественника Рr70.


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Определен полный аминокислотный состав р30 вирусов С-типа мышей, кошек, крыс и обезьян, свидетельствующий о сходстве этих белков по этому критерию. Белок р30 богат остатками аминокислот с полярными боковыми цепями (лизин, аргинин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты или их амиды), беден цистеином, метионином, гистидином и изолейцином. Исследование первых 30 остатков с NН2-конца р30 показало высокий уровень родства…

Основная масса вирусспецифических полипептидов синтезируется на мембраносвязанных полирибосомах, а часть находится во фракции свободных полирибосом, где и происходит их синтез. Методом иммунопреципитации пептидов удалось определить размеры этих полирибосом — 350S. Эта величина свидетельствует о том, что вирусные мРНК транслируются на полирибосомах, состоящих из 12 монорибосом. На полирибосомах такого размера могут транслироваться мРНК с молекулярной массой…

Продолжая эти исследования, Pawson и соавт. (1977) установили, что в бесклеточной белоксинтезирующей системе (использовали либо асцитные, либо клетки L) белок, синтезируемый геномной 30 — 40S-PHK RSV, имел молекулярную массу 76 000 и осаждался антисывороткой к разрушенному вирусу и р12, р30, но не антисывороткой к gp85. Смотрите — Трансляция РНК онкорнавирусов in vivo Следовательно, Рr76 является…

В клетках, зараженных R — MuLV, идентифицировано несколько быстрометящихся нестабильных высокомолекулярных белков: Prla±b (с массой около 200 000) — предшественник р30, р15, р12, р 10 и обратной транскриптазы; Prla±b (с массой около 90 000) — предшественник gp69/71, p 15(Е) и р12(Е); Рr3 (с массой около 80 000) и Рг4 (с массой около 70 000) —…

Продукт трансляции РНК вируса лейкоза мышей Раушера представляет собой полипептиды с молекулярной массой 120 000 и 180 000, а вируса лейкоза Молони — 60 000, 70 000 и 180 000. Не выявлено принципиальных различий в трансляции РНК онкорнавирусов в бесклеточных системах биосинтеза белка из клеток L и HeLa. Полипептид с молекулярной массой 60 000 синтезировался…