26 июня 2012

Бесклеточная белоксинтезирующая система

Продолжая эти исследования, Pawson и соавт. (1977) установили, что в бесклеточной белоксинтезирующей системе (использовали либо асцитные, либо клетки L) белок, синтезируемый геномной 30 — 40S-PHK RSV, имел молекулярную массу 76 000 и осаждался антисывороткой к разрушенному вирусу и р12, р30, но не антисывороткой к gp85.

Смотрите — Трансляция РНК онкорнавирусов in vivo

Следовательно, Рr76 является предшественником белков gs-комплекса и транслируется при этом только gag-ген. РНК, специфичная для RSV и выделяемая из клеток, зараженных этим вирусом, направляет синтез двух белков.

35 — 40S РНК осуществляет синтез Рr76, как и интактная вирионная РНК, в то время как 22 — 28S РНК кодирует синтез белка с молекулярной массой 70 000. Белок Рг70 осаждался антисывороткой к разрушенному вирусу и gp85, т. е., по-видимому, Рг70 представляет собой неглюкозилированный предшественник gp85.

Авторы предлагают модель трансляция вирусной РНК, согласно которой оба класса вирусспецифической РНК, выявляемой в полисомах инфицированных клеток (35 — 40S и 20 — 28S), кодируют синтез двух белковых предшественников: Рr76 с 5´-конца молекулы (gag-ген) и Рr70 с 3´-конца молекулы (еnu-ген).

Представленные данные согласуются с результатами экспериментов Hanafusa (1977). С помощью микро-инъекции 35S или 21S РНК из клеток, зараженных вирусом лейкоза птиц, вводили в куриные фибробласты, инфицированные RSV (штамм Бриан), который не способен синтезировать собственные гликопротеиды оболочки.

Оказалось, что в такой системе происходит продукция инфекционного RSV и именно 21S РНК экспрессируют эту активность. Аналогичные данные получены и для вирусспецифической мРНК (выявлены 14S, 22S, 35S) из клеток, инфицированных онкорнавирусами мышей (Many, 1977; Van Zaane et al., 1977). Обнаружено, что 35S РНК R — MuLV стимулирует синтез предшественника gs-антигенов (продукты гена gag), a 22S РНК направляет синтез двух полипептидов оболочки вируса и их белка-предшественника (продукты гена env).

Полученные данные свидетельствуют о том, что полипептиды, родственные продуктам генов gag и env R — MuLV, синтезируются некоординированно. Продукты трансляции PHKsarc пока не идентифицированы.

Во всех исследованных трансформированных MSV клетках людей, собак, кошек, крыс и мышей р60 представлял собой основной вирусный белок.

Он не выявлялся в контрольных клетках или в клетках, зараженных MuLV. В опытах с вытеснением импульсной метки, обнаружено, что р60 стабилен в клетках как минимум в течение 10 ч. Изучение вируса, продуцируемого в процессе вытеснения метки, показало, что «разрезание» р60 происходит в вирионе. В клетках выявляется весьма незначительное количество р30. С помощью радиоиммунологического анализа установлено, что уровень р30 в нормальных клетках составляет лишь 2% от его содержания в зараженных клетках (в нормальных клетках 3 нг на 1 мг клеточного белка).

Следовательно, р30 gs-активность в трансформированных клетках обусловлена р60. Вероятно в клетках, трансформированных MSV, р60 может служить маркером трансформации.

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Количественные определения в опытах с использованием импульсной метки, а также данные, полученные с ингибиторами белкового синтеза и канаванином, говорят о том, что протеолитическое расщепление Рrlа + b является первым путем образования промежуточных предшественников обратной транскриптазы — PrRTl, 2 и 3. Вместе с тем неясно, играет ли какую-то роль этот путь расщепления в образовании продуктов gag-гена….

Определен полный аминокислотный состав р30 вирусов С-типа мышей, кошек, крыс и обезьян, свидетельствующий о сходстве этих белков по этому критерию. Белок р30 богат остатками аминокислот с полярными боковыми цепями (лизин, аргинин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты или их амиды), беден цистеином, метионином, гистидином и изолейцином. Исследование первых 30 остатков с NН2-конца р30 показало высокий уровень родства…

Основная масса вирусспецифических полипептидов синтезируется на мембраносвязанных полирибосомах, а часть находится во фракции свободных полирибосом, где и происходит их синтез. Методом иммунопреципитации пептидов удалось определить размеры этих полирибосом — 350S. Эта величина свидетельствует о том, что вирусные мРНК транслируются на полирибосомах, состоящих из 12 монорибосом. На полирибосомах такого размера могут транслироваться мРНК с молекулярной массой…

В клетках, зараженных R — MuLV, идентифицировано несколько быстрометящихся нестабильных высокомолекулярных белков: Prla±b (с массой около 200 000) — предшественник р30, р15, р12, р 10 и обратной транскриптазы; Prla±b (с массой около 90 000) — предшественник gp69/71, p 15(Е) и р12(Е); Рr3 (с массой около 80 000) и Рг4 (с массой около 70 000) —…

На различных системах клеток, нормальных и трансформированных (спонтанно и под воздействием концерогенных факторов разной природы), были установлены три типа экспрессии вирусного генома, включенного в хромосомы и начавшего функционировать и реплицироваться вместе с генами хозяина. К первому типу относятся полная транскрипция и трансляция вирусного генома, обусловливающая спонтанную продукцию инфекционного вируса, второй тип характеризуется частичной экспрессией вирусной…