22 июня 2012

Продукт трансляции РНК вируса лейкоза мышей Раушера

Продукт трансляции РНК вируса лейкоза мышей Раушера представляет собой полипептиды с молекулярной массой 120 000 и 180 000, а вируса лейкоза Молони — 60 000, 70 000 и 180 000. Не выявлено принципиальных различий в трансляции РНК онкорнавирусов в бесклеточных системах биосинтеза белка из клеток L и HeLa.

Полипептид с молекулярной массой 60 000 синтезировался за 30 мин, а белок с массой 180 000 — за 90 мин. Полипептиды, синтезируемые в бесклеточных системах, реагировали с антисывороткой к разрушенному детергентом вирусу. При сравнении синтезированных полипептидов (с помощью метода фингерпринта триптических гидролизатов) оказалось, что белки с молекулярной массой 60 000 и 70 000 чрезвычайно похожи.

Эти пептиды обнаруживались и среди белков, полученных после переваривания цельного вируса. Среди пептидов с массой 180 000 имелись все белки, входящие в состав частиц с массой 60 000, 70 000 и в цельный вирион, кроме того, определялось незначительное количество пептидов, отсутствующих в двух указанных белках и вирусной частице.

Добавление S-аденозилметионина не влияло на уровень включения метки в кислотонерастворимую фракцию, что связано с наличием специфического фрагмента на 5´-конце, содержащего 7-метилгуанозин, который экранирует 5´-концевой трифосфат в молекуле 35S РНК (Kerr et al., 1976).

Метилгуаноэии связан в 5´-положении с предпоследним нуклеозидом, метилированным по 2´-0-рибозе. Такая же «закрывающая» структура (например, у РНК М — MuLV m7G5´ppp5´G mpCp) найдена и у 5´-конца различных мРНК эукариот.

Присоединение 7-метилгуанозина осуществляется посттранскрипционно и вместе с 3´-концевым полиаденированием является важным элементом процессинга.

Вирусные мРНК, лишенные 7-метилгуанозина на 5´-конце и сегментов поли-А на 3´-конце молекулы, обладают низкой матричной активностью (или она отсутствует) в синтезе белка.

Parks и Scolnick (1977) исследовали трансляцию в бесклеточной белоксинтезирующей системе (полученной из клеток NIH3T3) РНК вируса саркомы мышей Харви, в исходном препарате которого имеется два типа частиц: саркомный На — MSV и лейкозный MuLV. Если в систему вносили 60 — 70S РНК, то главным образом синтезировался белок с молекулярной массой 65 000, представляющий собой предшественник белков gs-комплекса.

Кроме того, обнаружен синтез других белков, в основном с молекулярными массами 140 000, 82 000 и 70 000 и в незначительных количествах с массами 57 000, 38 000 и 25 000. Если же в систему вносили РНК, обогащенную по На — MSV последовательностям, то синтез указанных белков снижался, но выявлялся доминирующий пик с молекулярной массой 21 000.

Считают, что этот белок является маркером, специфичным для На — MSV. Возможно, что протеин с массой 21 000 имеет «крысиную» природу, поскольку На — MSV представляет собой рекомбинант последовательностей MuLV и двух эндогенных вирусов крыс.

Итак, несмотря на противоречивость результатов, полученных при иследовании матричной активности вирионных РНК, можно придти к заключению, что 35S-субъединицы РНК онкорнавирусов транслируются в бесклеточных системах биосинтеза белка из клеток животных, т. е. в этом отношении они напоминают плюс-геномные РНК инфекционных вирусов, в то время как нативные вирионные 70S РНК, скорее всего, не транслируются.

Трансляция 355-субъединиц РНК происходит с одного участка инициации с образованием полипеитида — предшественника одного или нескольких белков, основным компонентом которых является gs-антиген.

Следовательно, главным «открытым» цистроном для трансляции геномной 35S РНК является ген gag, локализованный около 5´-конца молекулы.

Вместе с тем, исходя из особенностей репродукции онкорнавирусов, считают, что 35S РНК, несмотря на ее способность к трансляции, нельзя отнести к зрелым формам матрично активных РНК.


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Количественные определения в опытах с использованием импульсной метки, а также данные, полученные с ингибиторами белкового синтеза и канаванином, говорят о том, что протеолитическое расщепление Рrlа + b является первым путем образования промежуточных предшественников обратной транскриптазы — PrRTl, 2 и 3. Вместе с тем неясно, играет ли какую-то роль этот путь расщепления в образовании продуктов gag-гена….

Определен полный аминокислотный состав р30 вирусов С-типа мышей, кошек, крыс и обезьян, свидетельствующий о сходстве этих белков по этому критерию. Белок р30 богат остатками аминокислот с полярными боковыми цепями (лизин, аргинин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты или их амиды), беден цистеином, метионином, гистидином и изолейцином. Исследование первых 30 остатков с NН2-конца р30 показало высокий уровень родства…

Основная масса вирусспецифических полипептидов синтезируется на мембраносвязанных полирибосомах, а часть находится во фракции свободных полирибосом, где и происходит их синтез. Методом иммунопреципитации пептидов удалось определить размеры этих полирибосом — 350S. Эта величина свидетельствует о том, что вирусные мРНК транслируются на полирибосомах, состоящих из 12 монорибосом. На полирибосомах такого размера могут транслироваться мРНК с молекулярной массой…

Продолжая эти исследования, Pawson и соавт. (1977) установили, что в бесклеточной белоксинтезирующей системе (использовали либо асцитные, либо клетки L) белок, синтезируемый геномной 30 — 40S-PHK RSV, имел молекулярную массу 76 000 и осаждался антисывороткой к разрушенному вирусу и р12, р30, но не антисывороткой к gp85. Смотрите — Трансляция РНК онкорнавирусов in vivo Следовательно, Рr76 является…

В клетках, зараженных R — MuLV, идентифицировано несколько быстрометящихся нестабильных высокомолекулярных белков: Prla±b (с массой около 200 000) — предшественник р30, р15, р12, р 10 и обратной транскриптазы; Prla±b (с массой около 90 000) — предшественник gp69/71, p 15(Е) и р12(Е); Рr3 (с массой около 80 000) и Рг4 (с массой около 70 000) —…