22 июня 2012

Трансляция AMV

В бесклеточной системе из ретикулоцитов РНК AMV транслируется с образованием полипептида-предшественника с молекулярной массой 76 000 — 80 000 (Salden, Bloemendal et al., 1976).

Кроме этого, при трансляции РНК AMV синтезируется несколько предшественников с меньшей молекулярной массой и 4 основных структурных белка вируса. Все эти вирусспецифические продукты трансляции идентифицированы после иммунопреципитации антисывороткой против gs-антигенов AMV.

Изучено влияние различных вирионных белков на процесс превращения белка-предшественника (Pr76) RSV во внутренние структурные белки (Von der Helm, 1977).

Полипептид Рr76 синтезировался в бесклеточной системе Кребса, после чего в систему добавляли по отдельности структурные белки и анализировали продукты синтеза.

Установлено, что р19 и р27 не влияли на синтез предшественника, а р12 ингибировал процесс. Белок р15 вызывал разрушение Рг76 до более низкомолекулярных полипептидов. Конечными продуктами такого расщепления in vitro были р32, р27 и р12.

При анализе триптических пептидов р32, р27 и р12 выявлено, что последние два белка являются внутренними структурными полипептидами RSV. Белок р32 по пептидному составу практически идентичен р19, но содержит дополнительно еще два пептида.

Показано, что разрезание предшественника Рr76 осуществляется и в том случае, когда в систему вместо р15 вводили разрушенный RSV. Отмечена специфичность описанного феномена, о чем свидетельствовало его отсутствие, если в систему вместо RSV вносили вирус лейкоза Раушера.

С целью выявления продукта гена sarc Kamine и Buchnan (1977) провели сравнительный анализ белков, синтезирующихся в бесклеточной белоксинтезирующей системе (выделенной из лизатов ретикулоцитов), в результате трансляции 35S РНК из недефектного и дефектного в отношении трансформации RSV штамма Прага.

При разделении белковых продуктов электрофорезом в полиакриламидном геле и последующем анализе пептидов с помощью авторадиографии в обоих случаях определен гетерогенный набор белков с молекулярной массой 13 000 — 18 000.

В продуктах трансляции 35S РНК из мутантного, дефектного RSV отсутствовали два белка с молекулярной массой 25 000 — 18 000.

Ни один из этих белков не дает иммунопреципитации с моноспецифической сывороткой к структурным белкам онкорнавирусов птиц. Сумма молекулярных масс этих двух белков — 43 000 — соответствует тому количеству генетической информации (около 1200 нуклеотидов), которые отсутствуют в субъединице 35S-PHK дефектного штамма RSV (по сравнению с 35S-PHK трансформирующего RSV).

Предполагают, что обнаруженные белки кодируются геном sarc и один или оба белка ответственны за неопластическую трансформацию, вызываемую недефектным RSV. Особый интерес представляет также белок с молекулярной массой 60 000, который не осаждался антисыворотками к любому из структурных полипептидов вириона RSV и ни одним из видов сывороток от нормальных животных (Brugge, Erikson, 1977). Этот белок выявлялся в клетках хомяка, трансформированных SR — RSV, хотя в таких клетках не определялись полипептиды gs-комплекса, а лишь предшественник этих белков (Рr76).

В клетках кур и хомяков, инфицированных нетрансформирующим вариантом RSV или RAV50, белок с молекулярной массой 60 000 не обнаруживался, а в клетках, зараженных ts-мутантом RSV по гену sarc, количество этого протеина при непермиссивной температуре было значительно ниже.

Белок с указанной молекулярной массой удалось синтезировать в бесклеточной белоксинтезирующей системе, используя в качестве матрицы субгеномные фрагменты вирусной РНК.

Нельзя исключить, что этот протеин является вирускодируемым белком, специфическим для трансформации, однако его связь с геном sarc пока не установлена.


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Количественные определения в опытах с использованием импульсной метки, а также данные, полученные с ингибиторами белкового синтеза и канаванином, говорят о том, что протеолитическое расщепление Рrlа + b является первым путем образования промежуточных предшественников обратной транскриптазы — PrRTl, 2 и 3. Вместе с тем неясно, играет ли какую-то роль этот путь расщепления в образовании продуктов gag-гена….

Определен полный аминокислотный состав р30 вирусов С-типа мышей, кошек, крыс и обезьян, свидетельствующий о сходстве этих белков по этому критерию. Белок р30 богат остатками аминокислот с полярными боковыми цепями (лизин, аргинин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты или их амиды), беден цистеином, метионином, гистидином и изолейцином. Исследование первых 30 остатков с NН2-конца р30 показало высокий уровень родства…

Основная масса вирусспецифических полипептидов синтезируется на мембраносвязанных полирибосомах, а часть находится во фракции свободных полирибосом, где и происходит их синтез. Методом иммунопреципитации пептидов удалось определить размеры этих полирибосом — 350S. Эта величина свидетельствует о том, что вирусные мРНК транслируются на полирибосомах, состоящих из 12 монорибосом. На полирибосомах такого размера могут транслироваться мРНК с молекулярной массой…

Продолжая эти исследования, Pawson и соавт. (1977) установили, что в бесклеточной белоксинтезирующей системе (использовали либо асцитные, либо клетки L) белок, синтезируемый геномной 30 — 40S-PHK RSV, имел молекулярную массу 76 000 и осаждался антисывороткой к разрушенному вирусу и р12, р30, но не антисывороткой к gp85. Смотрите — Трансляция РНК онкорнавирусов in vivo Следовательно, Рr76 является…

В клетках, зараженных R — MuLV, идентифицировано несколько быстрометящихся нестабильных высокомолекулярных белков: Prla±b (с массой около 200 000) — предшественник р30, р15, р12, р 10 и обратной транскриптазы; Prla±b (с массой около 90 000) — предшественник gp69/71, p 15(Е) и р12(Е); Рr3 (с массой около 80 000) и Рг4 (с массой около 70 000) —…