22 июня 2012

Исследования наборов нуклеотидных последовательностей

Исследованы наборы нуклеотидных последовательностей в препаратах поли-А-содержащей РНК из ядер (РНКяд.) и полисом (РНКпс.) нормальных фибробластов мыши (линия ЗТЗ) и трансформированных MSV (Rolton et al., 1977).

Оказалось, что препараты РНКяд. из нормальных и трансформированных фибробластов не отличались друг от друга по гетерогенности нуклеотидных последовательностей и их количественным соотношениям.

Различия между популяциями РНКпс. из исследованных типов клеток незначительны. Они выражались в том, что РНКпс. из трансформированных фибробластов характеризовались повышением относительного содержания некоторых последовательностей, которые были минорными в составе РНКпс. из нормальных клеток.

В то же время доля некоторых последовательностей в РНКпс. из трансформированных фибробластов была снижена по сравнению с РНКпс. из нормальных клеток. Таким образом, вопрос о взаимосвязи между превращением нормального фибробласта в трансформированный и изменениями в составе РНКпс. остается невыясненным.

Итак, в вируспродуцирующих клетках природного хозяина синтезируются два типа РНК, т. е. транскрибируется полный интегрированный ДНК-провирус онкорнавирусов, в то время как в трансформированных клетках (неприродного хозяина) — от 30 до 50% вирусного генома.

Существенно, что в клетках различных злокачественных новообразований человека выявлены мРНК из полисомных фракций, имеющие нуклеотидные последовательности, сходные с вирионными РНК онкорнавирусов, вызывающих соответствующие неоплазии у животных.

При лейкозах человека, а также в клетках сарком и лимфом (включая болезнь Ходжкина и лимфому Беркитта) обнаружена РНК в комплексе с обратной транскриптазой, гибридизирующаяся только с 3Н-ДНК вируса лейкоза Раушера, но не с ДНК-продуктом MTV (Chezzi et al., 1976).

Аналогичная близость нуклеотидных последовательностей мРНК из раковых тканей молочных желез человека установлена только с геномом вируса рака молочных желез мышей. Оказалось также, что в тканях карцином молочных желез человека присутствует мРНК, способная гибридизироваться с 3Н-ДНК-продуктом вируса Мезона — Пфайзера обезьян.

Следовательно, экспрессия генетической информации в раковых тканях молочных желез мышей и человека отлична от экспрессии, которая имеет место в лейкозных и саркомных клетках разных видов млекопитающих. Кроме того, в самых разнообразных опухолях мышей и человека не удалось выявить последовательностей мРНК, комплементарных вирусу миелобластоза птиц.

Вирусспецифическая РНК, обнаруженная в различных злокачественных новообразованиях человека, имела высокую молекулярную массу (10Х106) и была инкапсулирована в частицы с плотностью 1,16 — 1,17г/мл.РНК, выделенная из этих частиц, гибридизировалась с 3Н-ДНК-продуктом мышиных онкорнавирусов, индуцирующих у мышей однотипные неоплазии (лейкозы и саркомы или злокачественные опухоли молочных желез).

Во всех экспериментах по выявлению вирусспецифических продуктов в опухолевых клетках человека успешно использовались два метода: гибридизация 3Н-ДНК-продукта с клеточными РНК и одновременная детекция вирусной 60 — 70S РНК и обратной транскриптазы.

Эффективной оказалась также гибридизация отдельных фракций тотального препарата РНК из опухолевой ткани с меченой полиуридиловой кислотой (3Н-поли-У), образующей комплекс с РНК, содержащей поли-А-фрагмент.

Поскольку вирусная РНК включает сегмент поли-А и седиментирует в градиенте сахарозы в зоне 60 — 70S, то наличие в этой зоне радиоактивности будет указывать на присутствие вирусной РНК в тотальном препарате клеточной РНК.

Таким образом, представленные данные указывают, с одной стороны, на весьма вероятную вирусную природу лейкозов, сарком, лимфом и злокачественных опухолей молочных желез у человека, а с другой — на общие закономерности и механизмы онкогенеза определенных типов неоплазий млекопитающих, которые, возможно, могут детерминироваться одними и теми же генами.

Последнее обстоятельство подтверждается наличием в лейкозных и саркомных клетках, а также в тканях опухолей молочных желез общих типов РНК.


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Количественные определения в опытах с использованием импульсной метки, а также данные, полученные с ингибиторами белкового синтеза и канаванином, говорят о том, что протеолитическое расщепление Рrlа + b является первым путем образования промежуточных предшественников обратной транскриптазы — PrRTl, 2 и 3. Вместе с тем неясно, играет ли какую-то роль этот путь расщепления в образовании продуктов gag-гена….

Определен полный аминокислотный состав р30 вирусов С-типа мышей, кошек, крыс и обезьян, свидетельствующий о сходстве этих белков по этому критерию. Белок р30 богат остатками аминокислот с полярными боковыми цепями (лизин, аргинин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты или их амиды), беден цистеином, метионином, гистидином и изолейцином. Исследование первых 30 остатков с NН2-конца р30 показало высокий уровень родства…

Основная масса вирусспецифических полипептидов синтезируется на мембраносвязанных полирибосомах, а часть находится во фракции свободных полирибосом, где и происходит их синтез. Методом иммунопреципитации пептидов удалось определить размеры этих полирибосом — 350S. Эта величина свидетельствует о том, что вирусные мРНК транслируются на полирибосомах, состоящих из 12 монорибосом. На полирибосомах такого размера могут транслироваться мРНК с молекулярной массой…

Продолжая эти исследования, Pawson и соавт. (1977) установили, что в бесклеточной белоксинтезирующей системе (использовали либо асцитные, либо клетки L) белок, синтезируемый геномной 30 — 40S-PHK RSV, имел молекулярную массу 76 000 и осаждался антисывороткой к разрушенному вирусу и р12, р30, но не антисывороткой к gp85. Смотрите — Трансляция РНК онкорнавирусов in vivo Следовательно, Рr76 является…

В клетках, зараженных R — MuLV, идентифицировано несколько быстрометящихся нестабильных высокомолекулярных белков: Prla±b (с массой около 200 000) — предшественник р30, р15, р12, р 10 и обратной транскриптазы; Prla±b (с массой около 90 000) — предшественник gp69/71, p 15(Е) и р12(Е); Рr3 (с массой около 80 000) и Рг4 (с массой около 70 000) —…