22 июня 2012

Контроль экспрессии интегрированного вирусного генома

Контроль экспрессии интегрированного вирусного генома начинает осуществляться на уровне транскрипции. Аналогичная ситуация имеет место и в системе клеток млекопитающих, трансформированных RSV. В клетках птиц транскрипция ДНК-провируса первично контролируется аутосомальным геном.

При этом выявлено, что ген, ответственный за положительную реализацию генетической информации, доминирует над геном, контролирующим отрицательную экспрессию вирусного генома. Предполагают, что в клетках птиц могут существовать и дополнительные контролирующие механизмы.

Показано, что после начального этапа репродукции зараженных ALV фибробластов кур и инициации синтеза вирусной РНК, которая составляла около 0,5% синтезирующейся РНК, скорость синтеза вирусной РНК не зависит от фазы клеточного цикла.

В синхронизированных не зараженных ALV клетках лишь 0,03% РНК было вирусспецифической и также не наблюдались какие-либо вариации в количестве этой РНК в клеточном цикле (Humphries, Coffin, 1976).

Вирусспецифические мРНК в клетках опухолей хомяка, индуцированных RSV, обнаружены только во фракции поли-А+ РНК (Brugge et al., 1977). Количество вс-РНК составляло от 0,008 до 0,01 % от тотальной цитоплазматической РНК, что в 50 — 100 раз меньше, чем в клетках кур, трансформированных RSV. Вся вс-РНК из цитоплазмы определялась в одном пике с коэффициентом седиментации 21S.

При анализе вс-РНК из ядер выявлялись 3 пика — 47S, 35S и 21S. В 47S РНК, вероятно, имеются как клеточные, так и вирусные последовательности. Отсутствие 35S РНК в цитоплазме, по-видимому, ограничивает репликацию RSV в клетках хомяка.

Интегрированные вирусные ДНК транскрибируются симметрично. В стабильной РНК минус-нить (комплементарная вирионной РНК) составляет около 40% вирусного генома и находится в форме двунитевой РНК.

Установлено, что ядерноцитоплазматический транспорт вирусных мРНК полностью определяется присоединением поли-А-блоков, т. е. и на уровне транспорта обусловливается контроль экспрессии вирусной информации.

В разных типах клеток обнаружено от 15 до 100 копий вирусного генома MTV, а вирусспецифическая РНК MTV составляет приблизительно 0,23% от общей клеточной РНК.

Особенно высокие концентрации этой РНК обнаружены в вируспродуцирующих тканях молочной железы и опухолях.

Практически не выявлено тканей свободных от РНК MTV, за исключением культур фибробластов in vitro, полученных из нескольких штаммов мышиных клеток. Отличий уровней экспрессии РНК MTV мышей высоко- и низкораковых линий не наблюдалось.

Обнаружена четкая корреляция между концентрацией внутриклеточной РНК MTV и уровнем продукции вируса, т. е. первичная регуляция продукции вируса происходит на транскрипционном уровне.


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Количественные определения в опытах с использованием импульсной метки, а также данные, полученные с ингибиторами белкового синтеза и канаванином, говорят о том, что протеолитическое расщепление Рrlа + b является первым путем образования промежуточных предшественников обратной транскриптазы — PrRTl, 2 и 3. Вместе с тем неясно, играет ли какую-то роль этот путь расщепления в образовании продуктов gag-гена….

Определен полный аминокислотный состав р30 вирусов С-типа мышей, кошек, крыс и обезьян, свидетельствующий о сходстве этих белков по этому критерию. Белок р30 богат остатками аминокислот с полярными боковыми цепями (лизин, аргинин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты или их амиды), беден цистеином, метионином, гистидином и изолейцином. Исследование первых 30 остатков с NН2-конца р30 показало высокий уровень родства…

Основная масса вирусспецифических полипептидов синтезируется на мембраносвязанных полирибосомах, а часть находится во фракции свободных полирибосом, где и происходит их синтез. Методом иммунопреципитации пептидов удалось определить размеры этих полирибосом — 350S. Эта величина свидетельствует о том, что вирусные мРНК транслируются на полирибосомах, состоящих из 12 монорибосом. На полирибосомах такого размера могут транслироваться мРНК с молекулярной массой…

Продолжая эти исследования, Pawson и соавт. (1977) установили, что в бесклеточной белоксинтезирующей системе (использовали либо асцитные, либо клетки L) белок, синтезируемый геномной 30 — 40S-PHK RSV, имел молекулярную массу 76 000 и осаждался антисывороткой к разрушенному вирусу и р12, р30, но не антисывороткой к gp85. Смотрите — Трансляция РНК онкорнавирусов in vivo Следовательно, Рr76 является…

В клетках, зараженных R — MuLV, идентифицировано несколько быстрометящихся нестабильных высокомолекулярных белков: Prla±b (с массой около 200 000) — предшественник р30, р15, р12, р 10 и обратной транскриптазы; Prla±b (с массой около 90 000) — предшественник gp69/71, p 15(Е) и р12(Е); Рr3 (с массой около 80 000) и Рг4 (с массой около 70 000) —…