13 июня 2012

ДНК-копия нуклеотидных последовательностей

Получена ДНК-копия нуклеотидных последовательностей, присутствующих только в саркомных и отсутствующих в лейкозных вирусах, т. е., вероятно, ответственная за злокачественную трансформацию ДНК sarc с размером около 2600 нуклеотидов.

Все штаммы RSV содержали sarc-последовательности, которые отсутствовали в РНК вирусов лейкозов птиц и сарком мышей, а также в геноме ДНК-содержащих онкорнавирусов. Sarc-специфические последовательности обнаружены и в нормальных клетках птиц (цыплята, перепелки, утки, страус эму).

Кинетика реассоциации между 3H-flHKSarc и ДНК из нормальных клеток кур свидетельствует о том, что sarc-специфические последовательности локализованы в неповторяющейся части ДНК и представляют собой одну (или несколько) копий на каждый гаплоидный набор ДНК клеток птиц.

С целью выяснения родства sarc-подобных последовательности определяли температуру плавления гибридов. Показано, что дуплексы с провирусной ДНК из опухолевых клеток имели более высокую температуру плавления, чем дуплексы с ДНК из нормальных клеток (Stehelin, 1976).

Установлено, что транскрипция последовательностей ДНКsarс в нормальных клетках осуществляется на низком уровне (1 — 3 копии на клетку) и лишь незначительно возрастает в клетках опухолей, индуцированных химическими канцерогенами (3 — 5 копий).

На основании этих фактов считают, что вирусные sarc-специфические последовательности имеют клеточную природу и выполняют какую-то важную физиологическую функцию.

С помощь 3Н-ДНК-транскрипта sarc-гена в вирусной популяции можно выявить частицы, геном которых имеет делецию по sarc-гену или по другим генам (например, enυ-гену), для которых получены 3Н-ДНК-транскрипты.

Существенно, что метод позволяет обнаружить в геноме инфицированной клетки одновременное присутствие двух провирусов, дефектного по sarc-гену, и недефектного (Stehelin et al., 1977).

При анализе генома клеток ХС, трансформированных RSV, популяция которого содержала как дефектные, так и недефектные частицы, установлено, что только ДНК-копии (20 копий на клетку) недефектных частиц интегрировались в геном клеток ХС.

Вероятнее всего, нормальные клетки приматов и человека не содержат информации известных к настоящему времени экзогенных онкорнавирусов С-типа. В частности, показано, что в ДНК лимфоцитов близнеца, больного лейкозом, имеются последовательности, комплементарные РНК из частиц С-типа, а в ДНК-лимфоцитов нормального близнеца они отсутствуют (Spiegelman et al., 1975).

Представлены также данные, свидетельствующие о том, что и при индуцированных FeLV-лимфопролиферативных заболеваниях в клетках выявляются последовательности вирусов С-типа, отсутствующие в клетках нормальных тканей (Levin et al., 1976).


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Количественные определения в опытах с использованием импульсной метки, а также данные, полученные с ингибиторами белкового синтеза и канаванином, говорят о том, что протеолитическое расщепление Рrlа + b является первым путем образования промежуточных предшественников обратной транскриптазы — PrRTl, 2 и 3. Вместе с тем неясно, играет ли какую-то роль этот путь расщепления в образовании продуктов gag-гена….

Определен полный аминокислотный состав р30 вирусов С-типа мышей, кошек, крыс и обезьян, свидетельствующий о сходстве этих белков по этому критерию. Белок р30 богат остатками аминокислот с полярными боковыми цепями (лизин, аргинин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты или их амиды), беден цистеином, метионином, гистидином и изолейцином. Исследование первых 30 остатков с NН2-конца р30 показало высокий уровень родства…

Основная масса вирусспецифических полипептидов синтезируется на мембраносвязанных полирибосомах, а часть находится во фракции свободных полирибосом, где и происходит их синтез. Методом иммунопреципитации пептидов удалось определить размеры этих полирибосом — 350S. Эта величина свидетельствует о том, что вирусные мРНК транслируются на полирибосомах, состоящих из 12 монорибосом. На полирибосомах такого размера могут транслироваться мРНК с молекулярной массой…

Продолжая эти исследования, Pawson и соавт. (1977) установили, что в бесклеточной белоксинтезирующей системе (использовали либо асцитные, либо клетки L) белок, синтезируемый геномной 30 — 40S-PHK RSV, имел молекулярную массу 76 000 и осаждался антисывороткой к разрушенному вирусу и р12, р30, но не антисывороткой к gp85. Смотрите — Трансляция РНК онкорнавирусов in vivo Следовательно, Рr76 является…

В клетках, зараженных R — MuLV, идентифицировано несколько быстрометящихся нестабильных высокомолекулярных белков: Prla±b (с массой около 200 000) — предшественник р30, р15, р12, р 10 и обратной транскриптазы; Prla±b (с массой около 90 000) — предшественник gp69/71, p 15(Е) и р12(Е); Рr3 (с массой около 80 000) и Рг4 (с массой около 70 000) —…