12 июня 2012

Исследование распределения вирусспецифических последовательностей

Исследование распределения вирусспецифических последовательностей в ДНК клеток различных органов незараженных и зараженных AMV цыплят показало, что все нормальные ткани содержат примерно равные количества ДНК, комплементарной 35S РНК AMV, что соответствует 1 — 3 копиям на гаплоидный клеточный геном.

У зараженных цыплят все ткани можно разделить на 3 категории:

  1. мышцы и мозг, в которых концентрация вирусной ДНК остается без изменений после инфекции;
  2. сердце, легкие, печень и селезенка, в которых концентрация вирусной ДНК увеличивается на 50%;
  3. лейкозные миелобласты, эритроциты и почки, в которых количество вирусной ДНК возрастает в 2 — 3 раза. Для выяснения природы вирусспецифических последовательностей после инфекции 3H-35S РНК AMV сначала гибридизировали с избытком ДНК из нормальных клеток в условиях насыщения.

Гибрид отделяли хроматографией на оксиапатите, а 3Н-РНК, которая не гибридизировалась с ДНК из нормальных клеток, подвергали рехроматографии с ДНК из инфицированных клеток.

Таким образом установили, что вирусспецифические последовательности опухолевых клеток появляются в этих клетках уже после инфекции и неидентичны тем, которые присутствуют в нормальных клетках.

Dastoor и соавт. (1977) провели специальное исследование мест интеграции онкорнавирусов птиц у различных хозяев.

Использованы следующие системы:

  1. эмбриональные клетки уток, зараженные вирусом саркомы птиц В77, в которых происходит как продукция вируса, так и трансформация клеток; 
  2. утиные клетки, инфицированные лейкозным вирусом RAV61, ассоциированным с RSV, в этой системе вирус размножается без трансформации клеток;
  3. мышиные ЗТЗ клетки, зараженные вирусом В77, в которых наблюдается трансформация, но нет продукции вируса.

Оказалось, что в фибробластах эмбриона утки провирусная ДНК В77 и RAV61 преимущественно интегрируется в уникальные участки клеточной ДНК. В непермиссивных клетках ЗТЗ мышей около 50% провирусной ДНК В77 ассоциируется с повторяющимися областями клеточной ДНК, а оставшаяся вирусная ДНК, вероятно, интегрируется с уникальными участками ДНК клетки.

Установлено, что РНК из хелпер-независимого, клонированного штамма RSV характеризуется высоким уровнем гибридизации с ДНК из клеток сарком и фибробластов, трансформированных in vitro (по сравнению с ДНК из нормальных клеток).

В инфицированных клетках выявляются 2 — 4 копии вирусного генома на гаплоидный геном. РНК эндогенных вирусов птиц субгруппы Е гибридизируется с ДНК нормальных клеток в большей степени, чем РНК из RSV.

В этом случае в клетках определяется на 1 — 2 копии вирусного генома больше, чем при инфицировании RSV.

Значительная доля фракции генома RSV (но не весь геном), которая способна образовывать гибриды с ДНК нормальных клеток, сходна с геномом эндогенного RAV0.

Из этих данных следует, что приблизительно 1/3 информации, вносимой RSV, является «экзогенной» для клетки и именно в этих последовательностях и локализован sarc-ген.

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Количественные определения в опытах с использованием импульсной метки, а также данные, полученные с ингибиторами белкового синтеза и канаванином, говорят о том, что протеолитическое расщепление Рrlа + b является первым путем образования промежуточных предшественников обратной транскриптазы — PrRTl, 2 и 3. Вместе с тем неясно, играет ли какую-то роль этот путь расщепления в образовании продуктов gag-гена….

Определен полный аминокислотный состав р30 вирусов С-типа мышей, кошек, крыс и обезьян, свидетельствующий о сходстве этих белков по этому критерию. Белок р30 богат остатками аминокислот с полярными боковыми цепями (лизин, аргинин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты или их амиды), беден цистеином, метионином, гистидином и изолейцином. Исследование первых 30 остатков с NН2-конца р30 показало высокий уровень родства…

Основная масса вирусспецифических полипептидов синтезируется на мембраносвязанных полирибосомах, а часть находится во фракции свободных полирибосом, где и происходит их синтез. Методом иммунопреципитации пептидов удалось определить размеры этих полирибосом — 350S. Эта величина свидетельствует о том, что вирусные мРНК транслируются на полирибосомах, состоящих из 12 монорибосом. На полирибосомах такого размера могут транслироваться мРНК с молекулярной массой…

Продолжая эти исследования, Pawson и соавт. (1977) установили, что в бесклеточной белоксинтезирующей системе (использовали либо асцитные, либо клетки L) белок, синтезируемый геномной 30 — 40S-PHK RSV, имел молекулярную массу 76 000 и осаждался антисывороткой к разрушенному вирусу и р12, р30, но не антисывороткой к gp85. Смотрите — Трансляция РНК онкорнавирусов in vivo Следовательно, Рr76 является…

В клетках, зараженных R — MuLV, идентифицировано несколько быстрометящихся нестабильных высокомолекулярных белков: Prla±b (с массой около 200 000) — предшественник р30, р15, р12, р 10 и обратной транскриптазы; Prla±b (с массой около 90 000) — предшественник gp69/71, p 15(Е) и р12(Е); Рr3 (с массой около 80 000) и Рг4 (с массой около 70 000) —…