11 июня 2012

Способность AMV транскрибировать вирусный геном в ДНК

Обнаружено, что ревертаза AMV способна транскрибировать вирусный геном в ДНК независимо от того, где локализована затравка три-тРНК или олиго-(дТ), на 5´-конце вирусной РНК или на 3´-конце молекулы (Collett Faras, 1977).

Это означает, что ДНК-транскрипты, инициируемые на три-тРНК-затравке на 5´-конце вирусной РНК, содержат также последовательности, присутствующие и в других частях генома и, возможно, на 3´-конце. Darlix и соавт. (1977) предложили новый метод для прямого анализа обратной транскрипции RSV, который имеет три основных преимущества: транскрипция контролируется in situ в процессе реакции, возможно определение фракции молекул РНК, активных в процессе транскрипции, и, наконец, возможно определение уровня транскрипции внутри популяции молекул РНК.

В результате удалось показать, что синтез ДНК инициируется главным образом на 3 участках субъединицы РНК, один из которых локализован около 5´-конца, а два — около середины молекулы.

Приблизительно 2/3 всех молекул РНК транскрибируется с участка на 5´-конце, эффективность транскрипции с внутренних участков в 2 раза ниже. Основная масса субъединиц РНК RSV является компетентной матрицей только для ограниченной транскрипции на специфических участках.

Для определения размеров вирусной ДНК Varmus и Shank (1976) экстрагировали ее из цитоплазматической фракции, центрифугировали в нейтральном градиенте сахарозы и затем отдельные фракции гибридизировали с вирусной 32Р-РНК.

Установлено, что основная масса минус-нитей ДНК представлена 27 — 30S-компонентом, что соответствует молекулярной массе 2,5 — 3,0X106, т. е. размеру одной субъединицы.

Плюс-нить обнаруживается в зоне 6 — 10S-компонента. Следовательно, вновь синтезированная неинтегрированная вирусная ДНК находится в цитоплазме в виде комплекса, состоящего из полной минус-нити и коротких плюс-нитей.

Структура молекулы и способ включения бромдезоксиуридина в ДНК свидетельствуют о том, что синтез неинтегрированной ДНК осуществляется с матрицы вирионной РНК с помощью обратной транскриптазы.

Из клеток ЗТЗ, зараженных Mo — MSV, выделена вирусспецифическая ДНК, которая к 8-му часу была представлена главным образом линейными молекулами с массой 3,4Х106 (Canaani et al., 1977).

Обнаружены также ковалентно замкнутые кольца и высокомолекулярная (возможно интегрированная) ДНК.

Установлена некоторая степень гибридизации противоположных концов вирусной ДНК с 3´-прилегающим участком вирионной РНК.

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Количественные определения в опытах с использованием импульсной метки, а также данные, полученные с ингибиторами белкового синтеза и канаванином, говорят о том, что протеолитическое расщепление Рrlа + b является первым путем образования промежуточных предшественников обратной транскриптазы — PrRTl, 2 и 3. Вместе с тем неясно, играет ли какую-то роль этот путь расщепления в образовании продуктов gag-гена….

Определен полный аминокислотный состав р30 вирусов С-типа мышей, кошек, крыс и обезьян, свидетельствующий о сходстве этих белков по этому критерию. Белок р30 богат остатками аминокислот с полярными боковыми цепями (лизин, аргинин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты или их амиды), беден цистеином, метионином, гистидином и изолейцином. Исследование первых 30 остатков с NН2-конца р30 показало высокий уровень родства…

В клетках, зараженных R — MuLV, идентифицировано несколько быстрометящихся нестабильных высокомолекулярных белков: Prla±b (с массой около 200 000) — предшественник р30, р15, р12, р 10 и обратной транскриптазы; Prla±b (с массой около 90 000) — предшественник gp69/71, p 15(Е) и р12(Е); Рr3 (с массой около 80 000) и Рг4 (с массой около 70 000) —…

Основная масса вирусспецифических полипептидов синтезируется на мембраносвязанных полирибосомах, а часть находится во фракции свободных полирибосом, где и происходит их синтез. Методом иммунопреципитации пептидов удалось определить размеры этих полирибосом — 350S. Эта величина свидетельствует о том, что вирусные мРНК транслируются на полирибосомах, состоящих из 12 монорибосом. На полирибосомах такого размера могут транслироваться мРНК с молекулярной массой…

Продолжая эти исследования, Pawson и соавт. (1977) установили, что в бесклеточной белоксинтезирующей системе (использовали либо асцитные, либо клетки L) белок, синтезируемый геномной 30 — 40S-PHK RSV, имел молекулярную массу 76 000 и осаждался антисывороткой к разрушенному вирусу и р12, р30, но не антисывороткой к gp85. Смотрите — Трансляция РНК онкорнавирусов in vivo Следовательно, Рr76 является…