Кинетика заражения куриных фибробластов инфекционными ДНК

Кинетика заражения куриных фибробластов инфекционными ДНК, выделенными из клеток, инфицированных RSV и REV, отражается одноударной кривой, т. е. вирусная ДНК интегрирует с клеточным геномом как одна целостная единица. В случае RSV инфекционность оценивали по фокусобразующей способности, а в случае REV — по цитопатогенному действию.

Показана независимая сегрегация двух вирусных геномов при одновременном заражении клеток RSV и REV (Cooper, Temin, 1974). Инфекционность при трансфекции наблюдалась при использовании ДНК из клеток, зараженных RSV в количестве 0,12 мкг, и 0,08 мкг для ДНК из клеток, инфицированных REV. Указанные количества клеточной ДНК были инфекционными, если фибробласты кур предварительно обрабатывали ДЭАЭ-декетраном (50 мкг/мл).

Если же обработка не производилась, то минимальное количество ДНК составляло 5 мкг. Сходные уровни инфекционности были получены при использовании ДНК из различных клеток — зараженных и трансформированных, как вируспродуцирующих, так и непродуцирующих. Инфекционность отсутствовала, если использовали ДНК из незараженных клеток.

Клетки уток и фазанов оказались чувствительными к трансфекции ДНК из куриных клеток, зараженных RSV и REV. ДНК из клеток, инфицированных RSV, с молекулярной массой 9Х106 и выше полностью сохраняет инфекционность, характерную для высокомолекулярной ДНК, в то время как ДНК с молекулярной массой 6Х10⁶ и 5Х10⁶ — лишь 20% и 5% инфекционности необработанной ДНК.

На основании этих данных считают, что масса инфекционной ДНК, содержащей всю генетическую информацию, необходимую для продукции RSV, для этой системы составляет 6Х10⁶. Для ДНК из клеток, зараженных REV, минимальная масса инфекционной ДНК равна 10 — 20Х106. Инфекционность вирусспецифической ДНК соответствует одной инфекционной единице на вирусную ДНК с молекулярной массой 10⁵ — 10⁶.

Для выделения вирусной РНК после интеграции с клеточной хромосомальной ДНК необходим фермент, гидролизующий только клеточную ДНК и не затрагивающий вирусную ДНК.

Показано, что рестриктаза из Anabaena variabilis (Ava I) удовлетворяет этим требованиям. Трансфекция ДНК (5 мкг) из клона клеток, полученных из единственного фибробласта эмбриона цыпленка, трансформированного RSV штамма Шмидта — Руппина субгруппа D (RS — D RSV), постоянно сопровождалась продукцией недефектного RSV (Kopecka et al., 1976).

Эта ДНК названа ndSR — DRSV. ДНК, экстрагированная из всей культуры фибробластов цыплят, трансформированных тем же вирусом, после трансфекции, давала начало как недефектному вирусу, так и вирусу, дефектному в отношении трансфекции, обозначена nd, td SR — D RSV.

Опыты по трансфекции показали, что в SR — D RSV ДНК есть специфические участки, которые узнают следующие рестриктазы: Hind II, Hind III, Hae III, Hpa I, Hpa II, Е. coli RI и Ava II. Рестриктаза Ava I не гидролизует ни nd, ни td SR — D RSV ДНК.

Таким образом, экспрессия ДНК-провируса в реципиентных клетках, с одной стороны, определяется их компетентностью (gs+ и chf+), а с другой — объемом генетической информации трансформирующего вируса, ассоциированной с ДНК опухолевой или инфицированной клетки.

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко