4 июня 2012

Композиционная сложность генома и механизмы рекомбинаций

Поскольку геном онкорнавирусов (60 — 70S РНК) состоит из нескольких субъединиц 30 — 40S РНК, процесс рекомбинации может осуществляться по одному из двух механизмов: перераспределения или кроссинговера. Так, Duesberg и соавт. (1975) доказали, что при рекомбинации онкорнавирусов птиц имеет место кроссинговер.

Ранее эти авторы установили, что 30 — 40S РНК недефектных вирусов сарком в среднем на 12% длиннее (субъединица «а») 30 — 40S РНК вирусов лейкоза (субъединица «b»).

Рекомбинанты между вирусами сарком и лейкоза содержат только 30 — 40S РНК, представляющую собой субъединицу «а».

Методом фингерпринта T1-РНКазных гидролизатов родительских 30 — 40S РНК-рекомбинантов показано, что при общем олигонуклеотидном сходстве в составе РНК из рекомбинантных форм имеются единичные олигонуклеотиды, отсутствующие или отличающиеся по подвижности от олигонуклеотидов диких штаммов.

Кроме того, у рекомбинантных молекул РНК с помощью электрофореза в полиакриламидном геле обнаружены и различия в размерах субъединиц 30 — 40S РНК — не более 70 000, а отличия между субъединицами «а» и «b» составляли 300 000 — 350 000.

Композиционную сложность 30 — 40S РНК определили двумя методами: исследовали размеры отдельных олигонуклеотидов, исходя из их мопонуклеотидного состава, и размеры поли-А-фрагмента. Как в первом, так и во втором случае была получена величина, равная 2,5Х106.

Следовательно, геном онкорнавирусов состоит из нескольких идентичных субъединиц, т. е. является сегментарно-полиплоидным, и процесс рекомбинации осуществляется по принципу кроссинговера.

Итак, обобщая сведения об организации генома онкорнавирусов птиц и млекопитающих, можно сделать следующие выводы.

  1. РНК недефектных вирусов сарком, способных как к репликации, так и трансформации, содержит, помимо генов, кодирующих синтез структурных компонентов вириона, два главных гена — ген «репликации» и ген «трансформации» (онкоген).
  2. Онкоген, вероятно, отсутствует в РНК вирусов лейкозов, а у td-вирусов сарком происходит, по-видимому, делеция сегмента трансформации, т. е. онкогена.
  3. У вирусов сарком, дефектных по репликации, онкоген присутствует, однако эти вирусы утрачивают ген «репликации».

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Количественные определения в опытах с использованием импульсной метки, а также данные, полученные с ингибиторами белкового синтеза и канаванином, говорят о том, что протеолитическое расщепление Рrlа + b является первым путем образования промежуточных предшественников обратной транскриптазы — PrRTl, 2 и 3. Вместе с тем неясно, играет ли какую-то роль этот путь расщепления в образовании продуктов gag-гена….

Определен полный аминокислотный состав р30 вирусов С-типа мышей, кошек, крыс и обезьян, свидетельствующий о сходстве этих белков по этому критерию. Белок р30 богат остатками аминокислот с полярными боковыми цепями (лизин, аргинин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты или их амиды), беден цистеином, метионином, гистидином и изолейцином. Исследование первых 30 остатков с NН2-конца р30 показало высокий уровень родства…

Основная масса вирусспецифических полипептидов синтезируется на мембраносвязанных полирибосомах, а часть находится во фракции свободных полирибосом, где и происходит их синтез. Методом иммунопреципитации пептидов удалось определить размеры этих полирибосом — 350S. Эта величина свидетельствует о том, что вирусные мРНК транслируются на полирибосомах, состоящих из 12 монорибосом. На полирибосомах такого размера могут транслироваться мРНК с молекулярной массой…

Продолжая эти исследования, Pawson и соавт. (1977) установили, что в бесклеточной белоксинтезирующей системе (использовали либо асцитные, либо клетки L) белок, синтезируемый геномной 30 — 40S-PHK RSV, имел молекулярную массу 76 000 и осаждался антисывороткой к разрушенному вирусу и р12, р30, но не антисывороткой к gp85. Смотрите — Трансляция РНК онкорнавирусов in vivo Следовательно, Рr76 является…

В клетках, зараженных R — MuLV, идентифицировано несколько быстрометящихся нестабильных высокомолекулярных белков: Prla±b (с массой около 200 000) — предшественник р30, р15, р12, р 10 и обратной транскриптазы; Prla±b (с массой около 90 000) — предшественник gp69/71, p 15(Е) и р12(Е); Рr3 (с массой около 80 000) и Рг4 (с массой около 70 000) —…