29 мая 2012

Саркомный ген

Принципиально важным аспектом проблемы однородности 30 — 40S РНК является их сходство или отличие у трансформирующих и нетрансформирующих фибробласты вирусов, т. е. вирусов сарком и лейкоза.

Наибольший интерес в этом аспекте представляет сравнение следующих групп вирусов птиц и млекопитающих: недефектных вирусов сарком, способных к одновременной трансформации фибробластов in vitro и образованию инфекционного потомства; нетрансформирующих вирусов сарком и вирусов лейкоза, не вызывающих трансформации, но способных к самостоятельной репликации, и, наконец, трансформирующих вирусов сарком млекопитающих, однако реплицирующихся только в присутствии вируса-помощника, т. е. дефектных вирусов.

С помощью электрофореза в полиакриламидном геле в РНК вирусов сарком птиц обнаружены два класса субъединиц «а» и «b», представляющие собой 30 — 40S РНК, отличающиеся по молекулярной массе («а» на 12 — 20% больше «b»).

В РНК вирусов лейкозов и нетрансформирующих вариантах вирусов сарком птиц определялась только субъединица «b». Установлено, что в процессе клонирования трансформирующих вирусов элиминируется РНК «b»-класса.

Присутствие gs-антигена в клетках культуры до заражения не отражается на электрофоретических свойствах вирусных РНК. В клонах вирусов PRC16 и SRA27, образующихся из клонированных колоний, трансформированных вирусом клеток, выявлен дополнительный компонент РНК, который мигрирует при электрофорезе медленнее РНК «а»-класса.

Медленный компонент исчезает после пассажей вируса на первичнотрипсинизированных культурах фибробластов, что указывает на связь его образования с клетками хозяина (Duesberg, Vogt, 1973). Предполагают, что клетки могут модифицировать вирусную РНК.

С помощью метода фингерпринта («отпечатка пальцев») удалось выявить различие в субъединицах «а» и «b»: «а» содержат один или два дополнительных олигонуклеотида, а «b» нет (Lai et al., 1973).

Олигонуклеотидные фингерпринты РНК вирусов птиц различных штаммов и субгрупп значительно отличаются друг от друга.

При перекрестной гибридизации субъединиц «а» и «b» вируса саркомы В77 с ДНК, транскрибированной с РНК нетрансформирующего вируса td-B77, обнаружено, что оба типа РНК («а» и «b») имеют 60% общих и 10% различающихся нуклеотидных последовательностей.

Эти 10% соответствуют молекулярной массе 300 000. Предполагают, что структурное взаимоотношение «а»- и «b»-субъединиц можно выразить формулой а = b + х и все олигонуклеотиды присутствуют только в РНК вирусов сарком, т. е. трансформирующие вирусы содержат в своем геноме дополнительный фрагмент (х).

Следовательно, нельзя исключить, что нуклеотидная последовательность х-фрагмента представляет собой саркомный ген (sarc) и участвует непосредственно в трансформации фибробластов in vitro.

Все штаммы вирусов сарком птиц содержали sarc-специфические последовательности, в то время как в РНК вирусов лейкоза птиц и сарком мышей и в геноме ДНК-содержащих онковирусов этот ген sarc отсутствовал (Stehelin, 1976).

«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Количественные определения в опытах с использованием импульсной метки, а также данные, полученные с ингибиторами белкового синтеза и канаванином, говорят о том, что протеолитическое расщепление Рrlа + b является первым путем образования промежуточных предшественников обратной транскриптазы — PrRTl, 2 и 3. Вместе с тем неясно, играет ли какую-то роль этот путь расщепления в образовании продуктов gag-гена….

Определен полный аминокислотный состав р30 вирусов С-типа мышей, кошек, крыс и обезьян, свидетельствующий о сходстве этих белков по этому критерию. Белок р30 богат остатками аминокислот с полярными боковыми цепями (лизин, аргинин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты или их амиды), беден цистеином, метионином, гистидином и изолейцином. Исследование первых 30 остатков с NН2-конца р30 показало высокий уровень родства…

Основная масса вирусспецифических полипептидов синтезируется на мембраносвязанных полирибосомах, а часть находится во фракции свободных полирибосом, где и происходит их синтез. Методом иммунопреципитации пептидов удалось определить размеры этих полирибосом — 350S. Эта величина свидетельствует о том, что вирусные мРНК транслируются на полирибосомах, состоящих из 12 монорибосом. На полирибосомах такого размера могут транслироваться мРНК с молекулярной массой…

Продолжая эти исследования, Pawson и соавт. (1977) установили, что в бесклеточной белоксинтезирующей системе (использовали либо асцитные, либо клетки L) белок, синтезируемый геномной 30 — 40S-PHK RSV, имел молекулярную массу 76 000 и осаждался антисывороткой к разрушенному вирусу и р12, р30, но не антисывороткой к gp85. Смотрите — Трансляция РНК онкорнавирусов in vivo Следовательно, Рr76 является…

В клетках, зараженных R — MuLV, идентифицировано несколько быстрометящихся нестабильных высокомолекулярных белков: Prla±b (с массой около 200 000) — предшественник р30, р15, р12, р 10 и обратной транскриптазы; Prla±b (с массой около 90 000) — предшественник gp69/71, p 15(Е) и р12(Е); Рr3 (с массой около 80 000) и Рг4 (с массой около 70 000) —…