25 мая 2012

Последовательности поли-А в геноме онкорнавирусов

Последовательности, обогащенные полиадениловой кислотой (поли-А), в настоящее время привлекают к себе пристальное внимание многих исследовательских коллективов.

Интерес этот вполне оправдан, так как ковалентно связанные поли-А-фрагменты обнаружены в таких важных классах РНК, как клеточных информационных и их ядерных предшественниках, а также в вирусспецифических и некоторых вирионных РНК тех вирусов, РНК которых выполняют функцию информационной, т. е. транслируются (или частично транслируются).

Универсальное распространение поли-А-блоков в транслируемых мРНК клеточного и вирусного происхождения указывает на их важную роль в процессе трансляции, однако какова эта роль, пока неизвестно. Вместе с тем следует отметить наличие четкой корреляции между присутствием поли-А-фрагментов в геномных РНК разных вирусов, их матричными функциями и инфекционностью.

Из таких вирусов в отдельную группу можно выделить онкорнавирусы, в вирионных РНК которых содержится 0,6 — 5% полиадениловой кислоты.

Молекулярная масса этих поли-А-сегментов составляет 3 — 6,8Х104 или 1Х105, что соответствует 100 — 200 остаткам адениловой кислоты. Иными словами, учитывая содержание поли-А и молекулярную массу вирусной РНК, на вирион в некоторых случаях может приходиться 3 — 4 фрагмента поли-А в 100 — 200 нуклеотидах с коэффициентом седиментации 3 — 4S.

Эти сегменты поли-А ковалентно связаны со всеми субъединицами вирусной РНК, что формирует регулярную структуру генома, состоящего из 2 — 4 субъединиц. Каждая из таких субъединиц может содержать последовательности поли-А, локализованные в области 3´-ОН-конца молекул 35S РНК, имеющего последовательность… Г(ЦУ)А190А ОН.

Кроме фрагментов поли-А, расположенных на 3´- конце молекул, обнаружены короткие обогащенные адениновыми остатками последовательности, входящие, вероятно, в состав двуспиральных «шпилек» с симметричным нуклеотидным составом.

Показано, что 60 — 70S РНК-комплекс состоит из 30 — 40S РНК субъединиц, содержащих поли-А (65%), и субъединиц, в которых поли-А отсутствует (около 30%).

Гетерополимерные участки этих двух типов 30 — 40S-субъединиц имеют идентичный олигонуклеотидный состав и полную гомологию (Joseph, Ihle, 1977).

Два олигонуклеотида, устойчивые к РНКазе Т1, по которым отличаются РНК RSV штамм Прага от делеционного мутанта, дефектного по способности трансформировать фибробласты, ассоциированы с 11S-фрагментом РНК RSV, обогащенным поли-А.

Следовательно, последовательности РНК, связанные с неопластической трансформацией фибробластов (онкоген), локализованы в пределах 5 — 10% от 3´-конца молекулы РНК RSV.

Предполагают, что большие блоки тголи-А, не связанные с клеточными РНК, имеют прямое отношение к онкогенезу, поскольку в ядре инфицированных клеток они нарушают регуляторные механизмы, следствием чего и является неопластическая конверсия.

Кроме того, считают, что сегменты поли-А могут выполнять одну из следующих функций: регулировать активность полимеразы, осуществляющей синтез ДНК с 70S РНК, т. е. быть местом инициации РНК-зависимого синтеза ДНК или синтеза вирусных субъединиц с вирусной ДНК; участвовать в сборке 60 — 705-генома из субъединиц 30 — 40S-PHK путем образования двойной спирали с участками, богатыми уридиловой кислотой (поли-У); транслироваться в полилизин, который в свою очередь может выполнять регуляторные функции при транскрипции РНК, а также служить сигналом при созревании вирусных белков и сборке вирусных частиц.

Наконец, нельзя исключить, что фрагменты поли-А могут обеспечивать своеобразную маскировку вирусных РНК, синтезированных в ядре с интегрированной вирусной ДНК, под собственные мРНК клетки.


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



Определен полный аминокислотный состав р30 вирусов С-типа мышей, кошек, крыс и обезьян, свидетельствующий о сходстве этих белков по этому критерию. Белок р30 богат остатками аминокислот с полярными боковыми цепями (лизин, аргинин, аспарагиновая и глутаминовая кислоты или их амиды), беден цистеином, метионином, гистидином и изолейцином. Исследование первых 30 остатков с NН2-конца р30 показало высокий уровень родства…

Количественные определения в опытах с использованием импульсной метки, а также данные, полученные с ингибиторами белкового синтеза и канаванином, говорят о том, что протеолитическое расщепление Рrlа + b является первым путем образования промежуточных предшественников обратной транскриптазы — PrRTl, 2 и 3. Вместе с тем неясно, играет ли какую-то роль этот путь расщепления в образовании продуктов gag-гена….

Основная масса вирусспецифических полипептидов синтезируется на мембраносвязанных полирибосомах, а часть находится во фракции свободных полирибосом, где и происходит их синтез. Методом иммунопреципитации пептидов удалось определить размеры этих полирибосом — 350S. Эта величина свидетельствует о том, что вирусные мРНК транслируются на полирибосомах, состоящих из 12 монорибосом. На полирибосомах такого размера могут транслироваться мРНК с молекулярной массой…

Продолжая эти исследования, Pawson и соавт. (1977) установили, что в бесклеточной белоксинтезирующей системе (использовали либо асцитные, либо клетки L) белок, синтезируемый геномной 30 — 40S-PHK RSV, имел молекулярную массу 76 000 и осаждался антисывороткой к разрушенному вирусу и р12, р30, но не антисывороткой к gp85. Смотрите — Трансляция РНК онкорнавирусов in vivo Следовательно, Рr76 является…

В клетках, зараженных R — MuLV, идентифицировано несколько быстрометящихся нестабильных высокомолекулярных белков: Prla±b (с массой около 200 000) — предшественник р30, р15, р12, р 10 и обратной транскриптазы; Prla±b (с массой около 90 000) — предшественник gp69/71, p 15(Е) и р12(Е); Рr3 (с массой около 80 000) и Рг4 (с массой около 70 000) —…