31 августа 2012

Взаимодействие химических индукторов и стероидных стимуляторов

Исследовано взаимодействие химических индукторов и стероидных стимуляторов при активации вирогенов мышиных эмбриональных клеток, способных к продукции различных эндогенных вирусов С-типа (Dunn et al., 1975).

Обработка клеток мышей линии BALB/c 5-йод-дезоксиуридином приводит к индукции ксенотропного вируса BALB-2; частота вирусиндуцированных клеток составляет 10-1,5.

Дополнительное воздействие на такие клетки гликокортикоидами (гидрокортизоном) не повышало числа вируспродуцирующих клеток. Вместе с тем установлено, что гидрокортизон резко (в 10 и более раз) увеличивает число вируссинтезирующих (вирус BALB-2) клеток BALB/c после обработки их циклогексимидом. Клетки BALB/c, кроме того, продуцируют N-тропный вирус BALB-1, а клетки мышей линии NIH не способны к синтезу этих типов эндогенных вирусов.

При изучении индукции обратных перекрестов клеток NIHX(NIHX BALB/c)F1 выявлено, что только клетки, содержащие информацию, необходимую для продукции вируса BALB-2, активируемую с помощью 5-йоддезоксиуридина, способны и к активации вируса при действии циклогексимида.

В противоположность этому эндогенные вирусы мышей линий BALB/c и С58, тропные для мышей линии NIH Swiss, более устойчивы к активации ингибиторами белкового синтеза.

Таким образом, гликокортикоидные стероиды увеличивают продукцию вируса клетками, обработанными ингибиторами любого класса. Отмечено также, что в системах, в которых циклогексимид и 5-йоддезоксиуридин блокируют синтез экзогенного вируса С-типа, стероиды тем не менее способствуют большей продукции вирусных частиц.

Возможно, что механизм действия 5-бром-, 5-йод-дезоксиуридина и циклогексимида сводится к активации вирогенов и продукции вирионов, тогда как стероиды лишь способствуют увеличению этой продукции. Установлено, что активирующее действие 5-бром- и 5-йоддез-оксиуридина на эндогенные онкорнавирусы возможно только после включения этих аналогов в состав клеточной ДНК.

Считают, что множественные однонитевые разрывы молекулы ДНК являются основным моментом активации интегрированного генома эндогенного вируса.

Максимальный активирующий эффект 5-йоддезокси-уридина наблюдается при внесении его в культуру между 13 — 18 ч от начала синхронизации, т. е. на восходящем участке кривой, отражающей синтез ДНК.

Для максимальной активации при использовании циклогексимида время внесения индуктора определяется интервалом между 24 — 29 ч от начала синхронизации, т. е. на стадии снижения синтеза ДНК. Активация ксенотропных эндогенных вирусов циклогексимидом требует синтеза РНК de novo во время воздействия индуктора, но не после его действия. При использовании митомицина С доказано, что процесс активации 5-йоддезоксиуридином и циклогексимидом не зависит непосредственно от митоза.

Вместе с тем при подавлении синтеза ДНК гидроокисью мочевины или арабинозидцитозином активация вируса под действием 5-йоддезоксиуридин а блокируется на 99%, а вызванная циклогексимидом не прерывается.

При подавлении синтеза РНК актиномицином D наблюдалось 1000-кратное ингибирование процесса активации синтеза вируса, вызванной циклогексимидом, и 3-кратное — при активации 5-йоддезоксиуридином (Stephenson, Aaronson, 1975). Следовательно, вероятно, что механизмы активации эндогенных вирусов под действием разных индукторов различны.

Предполагают, что блок синтеза ксенотропного вируса в мышиной клетке осуществляется лабильным белком, который либо ингибирует транскрипцию ДНК-провируса, либо разрушает вирусную РНК на посттранскрипционном уровне.

Угнетение белкового синтеза циклогексимидом приводит к истощению запасов синтезирующегося гипотетического белка, вследствие чего и происходит накопление вирусной РНК.


«Механизмы вирусного онкогенеза»,
А.И.Агеенко



В популяции эндогенного онкорнавируса мышей MuLV, индуцированного в клетках BALB/3T3 5-йоддез-оксиуридином, присутствовал как ксенотропный вирус, так и экотропный вирус N-типа (Laprevotte et al., 1977). При инфекции крысиных клеток линии NRK ксенотропным вирусом образовывались фокусы морфологической трансформации с веретенообразными клетками. Экотропный MuLV вызывал фокусы трансформации с округлыми клетками. Эти свойства трансформированных клеток сохранялись при дальнейшем пассировании…

Крайне важно, что пока нет прямых доказательств в пользу вертикальной передачи терминальными клетками дефектных или недефектных геномов этих вирусов, хотя sarc-специфические последовательности обнаружены в нормальных клетках некоторых видов птиц и мышей (Stehelin, 1976; Wang Lu Hai et al., 1976; Frankel, Fischinger, 1976, 1977). Есть основания предполагать, что sarc-гены присутствуют и в нормальных клетках крыс, в…

Таким образом, на основании сопоставления экспериментальных данных можно предполагать, что в нормальных клетках онкогены отсутствуют, во всяком случае в той форме, в какой они находятся в геноме экзогенных или эндогенных (пассированных) онкорнавирусов. Следовательно, пока не получены доказательства центрального постулата гипотезы Хюбнера — Тодаро, согласно которому онкоген постоянно присутствует в каждой нормальной клетке. Тогда что же…

Особый интерес представляет общность определенных белков клеточной поверхности и эндогенных вирусов, которые, с одной стороны, являются нормальными компонентами клетки, а с другой — входят в состав вирионных белков, т. е. являются вирусными белками. К таким белкам, например, относится так называемый антиген-Gix, являющийся типоспецифическим гликопротеидом gp69/71 эндогенного вируса Гросса и других экотропных вирусов и локализованный на…

К изучению иммунологических реакций организма на белковые продукты генов эндогенных вирусов приступили всего лишь 2 — 3 года назад. Вместе с тем этот аспект проблемы эндогенных вирусов имеет первостепенное значение, так как уже первоначальные исследования показали, что иммунореактивность, вероятно, может быть одним из механизмов регуляции экспрессии вирогенов. Принципиально важным как для теории, так и для…