13 января 2012

Метод определения хагеманзависимого фибринолиза (К. Н. Веремеенко и сотр., 1979)

Принцип метода основан на способности каолина активировать фактор Хагемана и таким образом значительно стимулировать внутренний путь активации фибринолиза.

В центрифужную пробирку наливают 9,5 мл. дистиллированной воды, добавляют 0,5 мл 1% раствора уксусной кислоты, 0,5 мл плазмы и 0,3 взвеси каолина (5 мг каолина на 1 мл дистиллированной воды). Смесь ставят на водяную баню при 37° С на 30 мин, а затем центрифугируют 3 мин при 1000 об/мин. Надосадочную жидкость осторожно сливают, а пробирку высушивают, переворачивая вверх дном на обеззоленный фильтр. Затем разводят осадок боратом, тщательно размешивают стеклянной палочкой, помещают пробирку на водяную баню при 37° С и добавляют 0,2 мл 0,277% раствора хлорида кальция. Засекают момент образования сгустка и включают секундомер. Через 5 мин и далее через каждую минуту проверяют, произошло ли растворение сгустка. В норме лизис сгустка соответствует 15—20 мин.

Удлинение времени растворения эуглобулинов при активации фибринолиза каолином свидетельствует главным образом об истощении калликреина и. высокомолекулярного кининогена, что отмечается при ТГС и тромбозах. Кроме того, удлинение хагеманзависимого фибринолиза наблюдается при увеличении концентрации антиплазминов. Ускорение времени хагеманзависимого фибринолиза наблюдается при его выраженной активации.

Метод определения эуглобулинового фибринолиза, активированного стрептокиназой (3. С. Баркаган и сотр., 1982; Б. И. Кузник и сотр., 1982)

Цитратную плазму получаем как обычно (см. эуглобулиновый метод определения фибринолитической активности крови). В пробирку вносим 9,5 мл дистиллированной воды, 0,14 мл 1% уксусной кислоты и 0,5 мл плазмы, после чего смесь помещаем в холодильник на 30 мин при +4° С. По прошествии указанного срока эуглобулины выпадают в осадок. Для их осаждения смесь центрифугируют 3 мин при 1000 об/мин, надосадочную жидкость сливают, а пробирку высушивают, как это указано в предыдущем методе. Осадок эуглобулинов растворяют в 0,5 мл бората (0,1% раствор) и вносят 0,05 мл стрептокиназы, разведенной таким образом, чтобы на эуглобулинах пулированной плазмы время растворения сгустка равнялось 8—10 мин.

Помещают пробирку на водяную баню и добавляют 0,2 мл 0,277% раствора СаСl2. После образования плотного сгустка тщательно следят за временем его растворения.

В норме фибринолиз, индуцированный стрептокиназой, должен осуществляться за 8—10 мин. Удлинение этого времени свидетельствует, как правило, об истощении плазминогена, что наблюдается при ТГС и тромбозах.

Очень редко удлинение фибринолиза, индуцированного стрептокиназой, зависит от повышения концентрации ингибиторов фибринолиза (при применении с терапевтической целью контрикала, гордокса и других антипротеаз).

Одновременное определение тотального эуглобулинового, хагеманзависимого фибринолиза и фибринолиза, индуцированного стрептокиназой, дает яркое представление о содержании калликреина, ВМК, плазминогена и ингибиторах фибринолиза (плазмина).


«Кровотечения и тромбозы при оториноларингологических заболеваниях»,
Г.А.Фейгин, Б.И.Кузник



Интервал времени от поступления первой порции крови в первую пробирку до конца свертывания крови во второй пробирке регистрируют как скорость свертывания крови. При этом можно внести поправку на время, которое потребовалось для заполнения кровью первой пробирки. Двухпробирочный тест производят лишь для того, чтобы исключить влияние турбулентного движения крови. Пример. Во вторую пробирку кровь начала поступать…

Среди методов, позволяющих выявить нарушения в коагуляционном гемостазе, мы считаем целесообразным определять время свертывания (Lee, White, 1913), каолиновое (Harttersley, 1966), кефалин-каолиновое (Caen et al., 1968), протромбиновое (Quick, 1966) и тромбиновое время (Biggs, Мс Farlane, 1962), концентрацию фибриногена (Р. А. Рутберг, 1961; М. С. Мачабели, 1962) и гепарина (Rabli, 1970), активность антитромбина-III (Henson, Loeliger, 1963; К….

В камере Горяева проводят прямой подсчет тромбоцитов, используя в качестве разводящей жидкости 1% раствор оксалата аммония, который гемолизирует эритроциты. Исследования можно проводить в капиллярной или венозной крови. Кровь набирают до метки 01 в смеситель для эритроцитов и разводят оксалатом аммония до метки 101, после чего содержимое перемешивают в течение 3 мин. За этот срок эритроциты…

Пробирку с 0,2 мл плазмы и с одним из разведений гемолизата прогревают на водяной бане при 37° С в течение 1 мин, а затем 0,05 мл гемолизата добавляют в плазму и включают секундомер. В проходящем свете при постоянном покачивании пробирки отмечают появление видимых агрегатов тромбоцитов («малые крошки») и останавливают секундомер. Сначала проводят исследования с разведением…

«Тест-тромбин» содержит 50 ед тромбина. Перед употреблением в ампулу, содержащую сухой тромбин, добавляют 1 мл 0,9% раствора хлорида натрия, взбалтывают и 0,2 мл переносят в отдельную пробирку, в которую добавляют 0,5 мл крови или нитратной плазмы. Образование сгустка в норме происходит за 5—11 с, что соответствует концентрации фибриногена 2—4 г/л. Замедление времени свертывания до 60…