13 января 2012

Определение количества тромбоцитов (Brecher et al., 1953)

В камере Горяева проводят прямой подсчет тромбоцитов, используя в качестве разводящей жидкости 1% раствор оксалата аммония, который гемолизирует эритроциты.

Исследования можно проводить в капиллярной или венозной крови. Кровь набирают до метки 01 в смеситель для эритроцитов и разводят оксалатом аммония до метки 101, после чего содержимое перемешивают в течение 3 мин. За этот срок эритроциты гемолизируются. Заполняют камеру Горяева и на 20 мин ставят ее во влажную камеру (чашку Петри, в которую помещена ваточка, смоченная физиологическим раствором). Тромбоциты подсчитывают в 25 больших квадратах.

Для определения числа тромбоцитов используют фазовоконтрастную приставку. При отсутствии последней можно обойтись и без нее, однако для этого необходим навык подсчета тромбоцитов.

Для расчета количества тромбоцитов в 1 мкл полученную величину умножают на 1000, для расчета в 1 л найденное число тромбоцитов умножают на 109.

Определять число тромбоцитов можно и по методу И. И. Данилина и В. Л. Крыжановского (1967). Принцип и техника выполнения та же, но в качестве разводящей жидкости используется Дитратно-фурацилиновый раствор, который приготовляется следующим образом: 3,5 г основного лимоннокислого натрия смешивают с 0,025 мл фурацилина и добавляют до 100 мл дистиллированную воду. Раствор кипятят, охлаждают и фильтруют. Хранить раствор следует в холодильнике.

При заборе крови в смеситель ее следует разводить в 200 раз (кровь набирают до метки 0,5, разводящую жидкость — до метки 101). Для подсчета числа тромбоцитов в 1 мкл полученную цифру следует умножить на 200. Достоинство метода заключается в том, что не требуется фазовоконтрастная приставка.

Гемолизат-агрегационный тест (Л. 3. Баркаган и соавт., 1986)

Гемолизат-агрегационный тест позволяет за короткий промежуток времени определить видимую глазом в проходящем свете агрегацию тромбоцитов. Методика его проведения заключается в следующем. В силиконированную центрифужную пробирку наливают 0,1 мл 3,8% цитрата натрия.

Без наложения жгута или путем легкого пережатия вены короткой иглой с широким просветом набирают кровь до метки 1 мл. Аккуратно покачивая, перемешивают кровь со стабилизатором. Путем центрифугирования при 1000 об/мин в течение 5 мин получают богатую тромбоцитами плазму и разливают ее по 0,2 мл в две пробирки.

Оставшиеся эритроциты трижды промывают физиологическим раствором и трижды центрифугируют (1500 об) в течение 10 мин. Таким образом получают взвесь красных кровяных телец. В дальнейшем 0,1 мл эритроцитов переносят в отдельную пробирку и гемолизируют 1,0 мл дистиллированной воды. Это разведение является основным (маточным) и обозначается как 10-1.

Далее из него в 5 пробирках готовят последовательные разведения гемолизата, для чего 0,1 мл каждого предыдущего разведения вносят в пробирку, содержащую 1,0 мл дистиллированной воды. Рабочими являются разведения 10-2 и 10-6 (1-я и 5-я после маточного раствора пробирки), что соответствует концентрациям 107 и 103 гемолизированных эритроцитов. Разведение 10-2 обозначается как максимальная, а 10-6 — как субпороговая доза.


«Кровотечения и тромбозы при оториноларингологических заболеваниях»,
Г.А.Фейгин, Б.И.Кузник



Интервал времени от поступления первой порции крови в первую пробирку до конца свертывания крови во второй пробирке регистрируют как скорость свертывания крови. При этом можно внести поправку на время, которое потребовалось для заполнения кровью первой пробирки. Двухпробирочный тест производят лишь для того, чтобы исключить влияние турбулентного движения крови. Пример. Во вторую пробирку кровь начала поступать…

Среди методов, позволяющих выявить нарушения в коагуляционном гемостазе, мы считаем целесообразным определять время свертывания (Lee, White, 1913), каолиновое (Harttersley, 1966), кефалин-каолиновое (Caen et al., 1968), протромбиновое (Quick, 1966) и тромбиновое время (Biggs, Мс Farlane, 1962), концентрацию фибриногена (Р. А. Рутберг, 1961; М. С. Мачабели, 1962) и гепарина (Rabli, 1970), активность антитромбина-III (Henson, Loeliger, 1963; К….

Пробирку с 0,2 мл плазмы и с одним из разведений гемолизата прогревают на водяной бане при 37° С в течение 1 мин, а затем 0,05 мл гемолизата добавляют в плазму и включают секундомер. В проходящем свете при постоянном покачивании пробирки отмечают появление видимых агрегатов тромбоцитов («малые крошки») и останавливают секундомер. Сначала проводят исследования с разведением…

«Тест-тромбин» содержит 50 ед тромбина. Перед употреблением в ампулу, содержащую сухой тромбин, добавляют 1 мл 0,9% раствора хлорида натрия, взбалтывают и 0,2 мл переносят в отдельную пробирку, в которую добавляют 0,5 мл крови или нитратной плазмы. Образование сгустка в норме происходит за 5—11 с, что соответствует концентрации фибриногена 2—4 г/л. Замедление времени свертывания до 60…

При наличии в плазме заблокированных фибринмономерных комплексов добавление протаминсульфата приводит к образованию в ней сгустка. Забор крови производится так же, как и при постановке этанолового теста. Разница лишь заключается в том, что после получения плазмы, богатой тромбоцитами, ее дополнительно центрифугируют при 4000 об/мин в течение 20 мин. К 0,4 мл плазмы, бедной тромбоцитами, в условиях…